目的:课题拟从体内、体外两个方面,探讨肉苁蓉总苷对小鼠酒精性肝损伤的保护作用。
方法:(一)体内实验:取昆明种小鼠40只,按其体重、性别随机分组,分别为模型组、空白组、肉苁蓉总苷小剂量组(50 mg/kg)和大剂量组(100 mg/kg)。连续灌胃给药28天,酒精每天1次,肉苁蓉总苷每天2次;到达时限后称重,眶动静脉丛采血处理,取血清检测各项肝功指标;小心摘取肝脏,吸水纸吸水后称重,计算肝脏指数;再剪取适量制成肝脏匀浆,相关试剂盒检测其生化指标;剩余肝脏用10%的甲醛固定后做病理学评价。(二)体外实验:原位灌流法收集小鼠肝细胞,测定生长曲线,取对数期生长细胞,MT T法评价其肉苁蓉总苷对损伤细胞活力的影响;显微技术评价肉苁蓉总苷对损伤细胞、细胞核形态的影响;流式细胞仪测定肉苁蓉总苷对损伤后细胞凋亡方面的影响;染色法评价肉苁蓉总苷对bcl-2、c-fos表达的影响。
结果:小鼠酒精性肝损伤后的肝功指标、肝脏指数显著升高(P<0.05);组织中TG、TC、脂质过氧化物(LPO)、丙二醛(MDA)的含量明显高于空白组(P<0.05);超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽还原酶(GSH-Px)的活性明显降低(P<0.05);病理学观察发现肝组织出现脂肪空泡和炎性浸润。表明肉苁蓉总苷能显著改变上述现象,表现在降低肝功指标(P<0.05)和肝脏指数,减少肝脏组织中TG、TC、MDA、LPO的含量(P<0.05),增强SOD、GSH-Px以及CAT的活性(P<0.05),减少肝脏组织脂肪空泡和炎性浸润的产生,其中大剂量肉苁蓉总苷组的作用更明显。原代肝细胞经酒精损伤后,细胞存活率降低(P<0.05),出现了显著的凋亡及坏死改变,凋亡抑制基因bcl-2表达减弱、促凋亡基因c-fos呈现增强现象。其结果显示,肉苁蓉总苷能显著提高细胞的存活率,改善凋亡及坏死情况,bcl-2的表达增强,c-fos的表达减弱,作用呈剂量依赖性。
结论:肉苁蓉总苷能通过减少自由基的产生,提高对自由基及其代谢产物的清除能力,进而抑制脂质过氧化,实现对酒精性肝损伤的保护作用,通过调节凋亡抑制基因 bcl-2和促凋亡基因 c-fos的表达,减少细胞的凋亡和坏死,增加细胞存活率而实现对原代细胞的保护作用。