目的:食管鳞癌是发生在食管上皮组织的恶性肿瘤,其发病分布具有明显的地区差异现象,主要发病于伊朗,俄罗斯,中国等地。致病原因主要包括:饮水中亚硝酸盐含量增高、食物被黄曲霉毒素污染、吸烟、饮酒、家族遗传因素等,治疗方式以手术切除根治为主,影响预后的因素主要为肿瘤侵袭深度,淋巴结转移情况等,一些研究显示,抑癌基因,如P53,P21等的表达也与预后有关。P53基因目前被认为是最重要的抑癌基因之一,其主要功能有诱导细胞凋亡,阻滞细胞周期等。P53功能的实现缘于其对上下游基因的调控,在紫外光照射,病毒感染等条件下,P53基因可能发生突变,随着P53的突变,失去了对上下游基因调控的功能。P21WAF1/CIP1是P53的一个下游基因,通过阻滞细胞周期G1/S来阻止细胞的扩增。正常情况下P53通过调控P21的表达行使其功能。但当P53突变时,导致依赖于P53的P21表达降低,其功能亦受到影响,不能阻滞细胞周期,引起细胞恶性增殖,导致肿瘤的发生。体外试验在某些肿瘤细胞株中P21 WAF1/CIP表达均呈现明显的P53依赖性,但在实体肿瘤中却并不都是如此。本实研究检测食管癌组织中P53,P21的表达情况,研究二者之间的关系,以期完善P53通路学说,并为研究P53和P21表达和患者吸烟饮酒之间的相关性。
方法:
1实验组采集河北医科大学第四医院胸外科2010年11月至2011年3月期间行手术治疗的食管癌患者的术中的新鲜肿瘤组织,术前未行放化疗治疗,术后经大体组织经病理诊断为鳞癌,残端均为阴性,手术清扫淋巴结数目均不小于6枚,共51例,其中男性患者35名,女性患者16名。对照组取自经内镜诊断的无上消化道恶性肿瘤的人食管粘膜组织,每例对照组分别取食管距门齿35cm处、25cm处、20cm处三段各1~2块,每例共3~5块,全组共32例,其中男性18例,女性14例。
2将取得的食管粘膜组织研磨提取蛋白,BCA法蛋白浓度测定,蛋白定量,蛋白变性,应用Western Blot技术经过制胶,电泳,转膜,封闭抗体,荧光显色等步骤,对实验组和对照组中P53和P21进行定性研究。
3应用统计学软件SPSS13.0,分析所得数据,所有数据以P<0.05,为统计学上有显著差异。
结果:
1 P53试验组P53表达阳性率为72.55%,对照组中阳性率为3%。P=0.000。有显著差异。病例组中,有淋巴结转移组的P53突变率为85.19%,无淋巴结P53突变率为58.33%,P=0.032,差异有统计学意义,肿瘤浸润全层的P53突变率为84.62%,未浸润全层的P53突变率为60.00%,P=0.049,差异有统计学意义。P53突变与患者年龄,性别,肿瘤位置和肿瘤长度无关。
2 P21实验组P21表达阳性率为31.37%,对照组中阳性率为53.13%。P=0.0495,差异有统计学意义。病例组中,有淋巴结转移组的P21阳性率为18.52%,无淋巴结P21阳性率为48.53%,P=0.032,差异有统计学意义,肿瘤浸润全层的P21阳性率为15.38%,未浸润全层的P21阳性率为48.00%,P=0.009,差异有统计学意义。P21表达与患者年龄,性别,肿瘤位置和肿瘤长度无关。P53~P21 WAF1/CIP1通路正常的淋巴结转移率为0.00%,低于通路不正常的患者,但肿瘤浸润深度并无类似分布。
3 P53,P21相关性在P53阳性患者中(即P53基因突变者)P21表达阳性率为24.32%,在P53阴性的患者中(即P53基因正常),P21表达阳性率为50%,两者比较P=0.154,无统计学意义。说明体内不止P53一种通路参与P21的调控,当P53发生突变后,还可能有其他通路诱导P21的表达。
4 P53、P21与烟酒史食管癌患者中,吸烟组的P53的突变率为87.10%,不吸烟组为50%(P=0.004),差异有统计学意义。吸烟组P21的表达率为19.35%,不吸烟组的表达率为50%(P=0.021),差异有统计学意义。饮酒组P53突变率和P21表达率与不饮酒组差异无统计学意义。
结论:
1在食管癌中存在P53突变,P21表达降低的现象。P53突变与P21表达降低极可能是食管癌发病的机制。吸烟可能通过引起P53突变,抑制P21表达引起抑癌基因功能丧失,进而引起食管癌的发生。
2 P53突变,P21表达缺失均与食管癌的浸润深度,淋巴结是否转移均有关,可作为提示预后的两个分子学指标进行检测,且在P53未发生突变,P21正常表达的食管癌患者中,其淋巴结转移的可能性较小。
3虽然P21是P53的下游基因,但在体内环境中,P21的表达不止依赖于P53的调控,需进一步研究P21在正常人内环境的中表达的调控。