鼓槌石斛肠粘膜免疫活性多糖的筛选及其理化性质和结构组成的研究

本文以鼓槌石斛为材料，从肠道粘膜免疫活性出发研究鼓槌石斛的各个组分，通过将鼓槌石斛多糖的提取、分离、纯化和免疫活性筛选相结合，获得了均一的多糖组分(DCP-F4)，优化了鼓槌石斛多糖的提取分离方法，对鼓槌石斛各组分进行了理化性质的测定，并对均一的高活性多糖的初级结构的进行分析，为鼓槌石斛多糖的构效关系的研究奠定了基础。实验结果如下:
　　(1)均一活性多糖的获得:将鼓槌石斛干粉按照酒精醇提、热水浸提、醇沉、脱蛋白、透析的步骤依次提取、分离，对得到的提取物DCE-A(7.48％)，DCE-B(7.93％)，DCE-C(7.14％)，DCE-D(4.67％)，DCP(3.72％)进行肠免疫活性初步筛选。接着对DCP进行酒精分级醇沉、阴离子交换柱分离、葡聚糖凝胶柱分离结合活性筛选得到高活性组分DCP-F4。
　　(2)鼓槌石斛多糖的肠道免疫活性:鼓槌石斛多糖的各提取物都具有很好体外肠道免疫活性，粗提取物作用组的骨髓细胞增殖率提高了3.3％-89.0％，通过逐级的分离，鼓槌石斛多糖含量越来越高，且肠道免疫活性也越来越高。粗多糖用60％的乙醇沉淀下来的多糖组分(DCP-2)的肠免疫活性较其他两个组分更好，在实验浓度范围内，骨髓细胞的增殖率在44.8％-91.4％。DCP-2进一步分离得到的各组分中以水洗糖的促进作用最强，骨髓细胞的增值率为56.1％-95.7％。水洗糖通过分离得到的组分中DCP-F4的活性最佳，对骨髓细胞的促进作用为对照组的2.136倍。
　　(3)鼓槌石斛均一多糖理化性质测定:DCP-F4的碳水化合物含量为94.32％，糖醛酸含量为1.85％，重均分子量为1.37×104Da，多分散系数为1.1497。DCP-F4的傅里叶红外分析具有多糖的标志吸收峰。样品的DSC分析表明多糖仅有一个122℃吸收热和316℃放热峰。多糖的单糖组成是由Xyl、Man、Glc构成的，比例为依次为1∶7∶16;单糖组成分析结合核磁分析，它们的一级结构大致是以1，4-linked Manp和1，4-linked Glcp为主链，支链由1，4，6-linked Manp分支形成，端基主要有T-linked Xyl、T-linked Glcp形成的糖链单元。