重组人心肌营养素-1生物活性的鉴定

心肌营养素是一种多效性细胞因子，具有广泛的生物学活性。为鉴定其生物学活性，本实验在构建pQE-CT1表达载体时插入FactorXa蛋白酶切位点，为获得非融合蛋白提供一种思路；利用5L发酵罐系统，采用分批补料方法高密度培养M15[pQE-CT1]表达rhCT-1，收获菌体湿重25.6g·L-1，rhCT-1表达量约占菌体总蛋白40％；通过Ni-NTA亲和层析纯化，利用含有还原型及氧化型谷胱甘肽的复性体系，恢复变性蛋白的天然构象，获得浓度为0.4g·L-1的活性蛋白质；利用异丙肾上腺素建立大鼠急性心肌缺血模型，rhCT-1能显著减轻异丙肾上腺素所致大鼠心肌组织损伤，抑制损伤大鼠血清谷草转氨酶(GOT)、磷酸肌酸激酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶-1(LDH-1)活性，逆转心肌组织中丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)含量的升高，提高大鼠心肌组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性；通过MTT法比较不同酒精浓度和不同酒精损伤时间造成的肝细胞损伤，确定以50mmol/L酒精损伤8h作为肝细胞酒精性损伤条件，并发现rhCT-1在(0.026-80)mg·L-1浓度范围内对酒精性肝损伤保护作用；酒精灌胃法建立小鼠酒精性肝损伤模型，给予rhCT-1后能减轻酒精所致的肝组织病理损伤，降低肝脏指数和血清中谷丙转氨酶(GPT)、GOT活性和甘油三酯(TG)含量，增加肝组织中还原型谷胱甘肽(GSH)含量，降低MDA水平；本实验证实大肠杆菌表达的rhCT-1对受损心肌细胞和肝细胞有明显的保护作用，为今后的科研及应用研究奠定了基础。