不同发酵时期酸马奶中乳清蛋白的分离及差异蛋白的初步研究

酸马奶是以鲜马奶为原料，经乳酸菌、酵母菌等微生物的作用下生成的低酒精含量的乳饮料。随着现代分子生物学及生物化学分离技术的不断发展和蒙医学理论的逐渐完善，研究者认识到酸马奶微生物及其营养成分具有很高的益生作用。近几年，人们发现酸马奶中酪蛋白和乳清蛋白的含量比例(1∶1)很适合机体的消化和吸收。但是，人们很少关注酸马奶乳蛋白在不同发酵阶段中的变化。基于以上情况，本研究以酸马奶乳清蛋白为研究对象，采用SDS-PAGE电泳方法，并结合Image-Lab凝胶分析软件得到了以下结果:
　　1.为了找出适合分离酸马奶乳清蛋白质的SDS电泳体系，对分离胶浓度、浓缩胶浓度、分离胶电压、上样体积、染色方法、上样浓度等方面进行电泳条件的优化。结果显示，分离胶浓度为12％、浓缩胶浓度为5％、分离胶电压为180V、上样体积为16ul、染脱色法为改良考马斯亮蓝染色法时，能够很好地分离酸马奶乳清蛋白各组分，而且通过SDS-PAGE方法学验证试验，该体系具有很高的精确度，相对标准偏差(RSD)小于3％。
　　2.在确定SDS电泳条件以及调节上样浓度为0.5ug/ul的基础上，通过建立低分子量标准蛋白曲线和利用Image-Lab凝胶软件分别测定和分析了酸马奶乳清蛋白分子量和不同发酵时期乳清蛋白的差异变化结果如下:
　　(1)本研究根据不同发酵时期酸马奶乳清蛋白电泳图及通过建立低分子量蛋白标准曲线，得到的分子量范围为1.033×104-6.720×104 Da，共分离出13条蛋白区带。共有的蛋白条带有5条，8条差异蛋白条带。而8条差异蛋白条带中有2条为新生成的蛋白，其他6条仅为条带强度上表现其差异;
　　(2)测定分子量的基础上，通过Image-Lab凝胶软件分析了酸马奶乳清蛋白成分强度在不同发酵期中的变化规律，结果表明，分子量为6.720×104Da和1.269×104Da的蛋白质分别在发酵过程的60h和72h后，呈现降低的趋势;而其他蛋白质呈现无规则变化或无明显变化。