目的:探讨姜黄素(CUR)对大鼠酒精性肝病的干预作用及其对肝组织Cathepsin B(Cat B)与Cystatin C(Cys C)表达的影响。
方法:
1.42只SD大鼠,随机分为三组,对照组12只、模型组15只、治疗组15只。采用酒精灌胃法制备大鼠酒精性肝病模型(ALD)。造模第六周始,治疗组酒精灌胃的基础上给予姜黄素灌胃。
2.12周末处死大鼠,测定各组大鼠肝指数的变化,检测血清中天门冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)含量,计算AST/ALT值。
3.用苏木素-伊红(HE)染色,光学显微镜观察各组大鼠肝脏病理学变化。
4.分别用免疫组化SABC法、Western Blot检测各组肝组织Cat B、Cys C蛋白水平的表达差异。
5.RT-PCR法检测各组肝组织Cat B及Cys C mRNA水平的表达差异,采用吸光度值分析其相对含量。
结果:
1.模型组肝指数较对照组显著升高; CUR组肝指数较模型组明显降低,且较对照组稍高,差异无统计学显著性。
2.HE染色结果:光学显微镜观察,模型组肝细胞肿胀,胞浆内可见大小不等的脂肪空泡,汇管区可见炎性细胞侵润,表现为明显肝脏脂肪变性;CUR组则显示肝细胞损伤明显减轻。
3.模型组大鼠血清ALT和AST水平较对照组均明显升高;CUR组血清ALT和AST水平与对照组相比轻度升高,但较模型组明显下降。
4.免疫组化和Western Blot的结果:模型组肝组织Cat B及Cys C蛋白表达水平均较对照组显著上调;CuR组Cat B及Cys C蛋白表达水平均较模型组明显下调;CUR组较对照组稍高,差异无统计学意义。
5.RT-PCR结果显示:模型组肝组织Cat B及Cys C mRNA表达较对照组均明显升高;CUR组肝组织Cat B及Cys C mRNA表达较对照组稍高,差异无统计学意义,但明显低于模型组。
结论:
1.cat B及Cys C基因表达上调可能参与了酒精性肝病的发生、发展过程,并推测其在酒精性肝病肝细胞凋亡过程中可能发挥了重要的作用。
2.姜黄素对实验性酒精性肝病大鼠肝细胞具有较好的保护作用,可能通过降低Cat B及cysC基因的表达来实现。