耐高温、耐乙醇酿酒酵母筛选及其原生质体制培养

乙醇大多数通过微生物发酵法进行生产。酿酒酵母的温度和乙醇耐受性是生产乙醇的重要限制因素,一直以来都是发酵工业研究热点。本文以酿酒酵母(Saccharomy cescerevisiae)1373和安琪高活性干酵母(简称安琪酵母)为材料,在了解菌株生长曲线、基础温度和乙醇耐受性的基础上,分别进行紫外诱变,筛选出温度和乙醇浓度耐受性都提高的两株酿酒酵母突变株。进一步研究制备其原生质体的最适合条件,获得的主要结果有:
　　 1、酿酒酵母1373和安琪酵母菌株的生长与培养时间有直接联系,对数期中种子液OD值较大者则延滞期较短,能快速进入对数生长期。
　　 2、将处于对数期中期的菌液适当稀释涂布,分别置于39℃、40℃、41℃、42℃、43℃、44℃、45℃温度梯度和4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％乙醇浓度(v/v)梯度下培养,结果显示安琪酵母耐乙醇浓度最高,达9％,酿酒酵母1373能在40℃温度下生长。因此,分别选取安琪酵母诱变,获得乙醇耐受性提高的突变菌株,选取酿酒酵母1373进行诱变,获得温度耐受性提高的突变菌株。
　　 3、对安琪酵母和酿酒酵母1373进行紫外诱变,分别获得了能在11％乙醇浓度条件下生长的突变菌株Uanqi和47℃高温下生长的的突变菌株U1373。
　　 4、以突变菌株Uanqi和U1373为出发菌株,对其原生质体的最佳形成率和最佳再生率的条件进行研究,包括培养时间,酶系统,酶作用的浓度,酶作用的时间及渗透压稳定剂等方面,获得了原生质体形成和再生的最佳条件:菌龄为对数期中期,酶解温度37℃,渗透压稳定剂及高渗再生培养基均为山梨醇,对酿酒酵母U1373,蜗牛酶浓度1.0％,在此条件下,其原生质体形成率与再生率达分别为99.21％和34.58％。对安琪酵母突变株来说,1.0％混合酶最好,其最佳原生质体形成率达99.48％,而再生率却是1％蜗牛酶较高,达5.83％。
　　 以上研究结果为耐高温酵母菌种和耐乙醇酵母菌种的分离选育研究提供基础。