大豆素的体外抗氧化作用及对酒精性肝损伤的保护作用

目的：以大豆素（Daidzein，DAI）为研究对象，研究DAI的体外抗氧化活性及对大鼠原代肝细胞酒精性肝损伤的保护作用，并为治疗酒精性肝损伤提供新的思路和解决方案。 方法： 1.模拟机体中黄嘌呤与黄嘌呤氧化酶反应系统，产生超氧阴离子?O2-，检测DAI清除?O2-能力；根据Fenton 反应原理产生羟自由基?OH，检测DAI清除?OH 能力。 2.两步胶原酶技术分离培养大鼠原代肝细胞，并建立大鼠原代肝细胞酒精性氧化损伤模型（100mM无水乙醇E-OH染毒大鼠肝细胞8h）。 3.MTS比色实验观察不同剂量E-OH对大鼠原代肝细胞氧化损伤作用，及DAI的预作用（1.0μM的DAI预作用2 h）对E-OH致大鼠原代肝细胞酒精性氧化损伤的保护作用。 4.大鼠原代肝细胞在E-OH染毒前不同时间点经1.0μM的DAI处理或不同剂量（0.5～20μM）DAI预作用2h，用酶学及生化学方法分析DAI预作用对细胞培养上清液中丙氨酸氨基转移酶（Alanine Aminotransferase，ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（Aspartate Aminotransferase，AST）活性，细胞中丙二醛（Malondialdehyde，MDA）、谷胱甘肽（Glutathione，GSH）水平和超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase，SOD）活性，以确定DAI对肝细胞酒精性氧化损伤的最佳干预时间与干预剂量。 结果： 1.DAI对?O2-和?OH都有一定的清除能力，并与槲皮素（Quercetin，QE）和VitC清除自由基的能力比较，DAI清除自由基的能力强于VitC但比QE弱。 2.MTS比色实验显示随着E-OH剂量的上升，对大鼠原代肝细胞酒精性氧化损伤加剧（P<0.05）；1.0μM的DAI预作用2h可明显改善E-OH所致的氧化损伤（P<0.01）。 3.DAI预作用对酒精性肝损伤的保护作用的时间剂量效应：E-OH暴露前2-6h经0.5～2.5μM的DAI干预，保护效果明显，ALT、AST、MDA水平与酒精组比较，显著性降低（P<0.01），GSH、SOD水平较酒精组则显著性升高（P<0.01）。 结论： 1.DAI具有直接清除?O2-和?OH的体外抗氧化作用。 2.DAI预干预可能通过减少GSH耗竭，提高抗氧化酶活性，抑制脂质过氧化来保护大鼠原代肝细胞酒精性氧化损伤，且保护作用呈一定的剂量与时间效应关系。