黄酒中活性肽的分离纯化的研究

黄酒是我国的民族特产，被视为养生保健佳品，对心血管疾病等有很好的疗效，但是缺乏实验支持。本研究以黄酒中的活性多肽为研究对象，研究了活性多肽的分离纯化方法及血管紧张素转化酶(ACE)抑制活性的测定。
　　 采用大孔树脂对黄酒中的多肽进行初步分离，从5种大孔树脂中筛选出适合分离多肽的树脂，探究该树脂的最佳吸附和分离条件，结果表明：DA201-C树脂对多肽吸附量大，解吸率高，该大孔树脂富集黄酒中多肽的最佳条件为：上样流速0.5BV/h，上样浓度为3.2mg/ml，洗脱溶剂为70％的乙醇，洗脱流速为1BV/h。DA201-C树脂对多肽的等温吸附在25℃时，能很好的符合Langmuir吸附等温式和Freundlich方程，两者的相关系数分别为0.998和0.993，此时最大吸附量Qm为40mg/g，Kl为0.04。大孔树脂吸附前后的样品经高效液相色谱分析，结果显示其纯度大大增加，由6.8％提高到66.7％，纯化倍数为9.8。
　　 采用高速逆流色谱和反相层析法，对多肽粗品进行进一步分离纯化。通过对各溶剂系统分层时间、上下相体积比、分配系数的比较及分析型HSCCC的对溶剂体系的快速筛选，最终确定了甲基叔丁基醚：乙腈：水2:2:3体系，加入的溶剂对是三氟乙酸和氨水。制备型HSCCC在制备样品的过程中，对主机转速、循环水浴温度以及上样浓度进行了优化，最佳操作参数为转速900r/min，温度25℃、上样浓度10mg/ml、流动相流速为1.8ml/min。对HSCCC分离出的组分P1进行SOURCE5RPC反相层析，得到组分P1-1与P1-2。经进一步分析显示P1-1为单一峰，氨基酸组成为Thr、Ser、Gly、Ile和Phe，其中Ile和Phe对ACE抑制肽的生物活性有重要作用。
　　 采用高效液相色谱法，检测了组分P1的体外ACE抑制活性，结果显示组分P1有较强的ACE抑制活性，其IC50为0.61mg/ml。