毛百合组织培养与试管鳞茎膨大的研究

本试验以毛百合鳞片、无菌苗叶片为外植体，建立高效组织培养再生体系，为毛百合的育种、遗传转化、园林应用及生产等奠定理论基础。探讨了不同浓度的活性炭(AC)、蔗糖、大量元素、NAA、IBA、多效唑(PP333)、水杨酸(SA)、以及培养基状态对鳞茎形成及膨大的影响，以期为毛百合引种驯化及试管微鳞茎的工厂化生产提供理论依据及关键技术。
　　1.以毛百合鳞片为外植体建立了组培快繁再生体系
　　试验发现消毒处理采用75％酒精和2％次氯酸钠灭菌12min最佳;中层鳞片为组织培养的最佳外植体，鳞片不同部位的诱导及分化能力由强到弱依次基部、中部、顶部;单因子试验表明，6-BA与不定芽诱导和愈伤的形成有直接关系，鳞片诱导不定芽的最佳培养基MS+6-BA2.0mg/L分化率86.7％，分化系数4.70;愈伤诱导及分化最佳培养基MS+6-BA（1.0-2.0mg/L），诱导率83.3％，分化系数6.25;2，4-D（小于2.0mg/L）促进愈伤的形成及分化，但对不定芽的分化无影响;双因子试验表明，愈伤诱导及分化的最佳培养基是MS+6-BA0.5mg/L+2，4-D1.0mg/L;诱导率90％，分化系数7.44;诱导不定芽的最佳培养基MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.5mg/L，分化率86.7％，分化系数5.69;不定芽增殖的最佳培养基MS+BA1.0mg/L+NAA0.1 mg/L，增殖系数7.8。最佳生根培养基MS+AC0.5mg/L，生根率100％，移栽到珍珠岩基质中，成活率达85％。
　　2.以无菌苗叶片为外植体建立再生体系
　　试验发现叶片的诱导分化存在着显著的位置效益，叶片的诱导分化能力由强到弱依次是基部、中部、顶部;不定芽诱导最佳培养基MS+NAA0.3mg/L+6-BA2.0mg/L，分化率86.7％，分化系数4.31;不定芽增殖最佳培养基MS+NAA0.1mg/L+6-BA2.0mg/L，增殖系数4.93，生长良好;最佳生根培养基1/2MS+NAA1.0mg/L和1/2MS+IBA1.0mg/L，生根率均达100％。移栽幼苗成活率达82％以上。
　　3.鳞茎膨大试验研究
　　试验发现当AC浓度为1.0g/L时，鳞茎直径增大2.50倍，鲜重828.2mg，结鳞茎率100％，新增鳞茎4.40个;当NAA浓度为1.0mg/L时，鳞茎直径增大2.26倍，鲜重658.4mg，新增鳞茎2.60个;当IBA浓度在1.0-2.0mg/L范围时，结鳞茎率均100％，鳞茎直径均增大2.04倍，当IBA浓度为1.0mg/L时，新增鳞茎数2.57个，当IBA浓度为2.0 mg/L时，更有利于鳞茎的膨大，鲜重675.8mg;2MS对鳞茎的形成和膨大的效果最好，鳞茎直径增大2.37倍，鲜重696.5mg，结鳞茎率为100％，新增鳞茎3.60个;当蔗糖为90 g/L时，鳞茎直径增大2.05倍，鲜重628.3mg，结鳞茎率100％，新增鳞茎1.37个;当PP333浓度为10mg/L时，鳞茎直增大2.20倍，鳞茎鲜重625.4mg，结鳞茎率100％。水杨酸有利于提高鳞茎的诱导率，但不利于鳞茎膨大，当水杨酸浓度为0.5mg/L时，结鳞茎率87％，新增鳞茎4.63个。从鳞茎膨大效果和接种方便上考虑，生产上以半固培养方式为佳，鲜重448.2mg，结鳞茎率92％，平均鳞茎2.70个;经膨大处理的小鳞茎无需生根即可移栽，鳞茎直径大于8mm的植株长势较好，移栽后易成活。