石见穿抗人免疫缺陷病毒作用及其有效部位的研究

目的:
　　将石见穿进行分离提取，从中筛选出具有抗HIV作用的有效化合物。
　　方法:
　　用75％工业酒精对石见穿进行回流，再依次用石油醚、乙酸乙酯、氯仿和正丁醇对乙醇提取部位进行萃取。体外细胞实验从中初步筛选出抗HIV的粗提取物，将石见穿有效粗提取部位通过硅胶柱色谱洗脱，薄层色谱分析，香草醛显色，以及高效液相色谱仪制备，核磁共振鉴定结构等药物提取分离的方法分离出有效化合物。体外筛选有效成分的指南为以HIV感染CEMx174细胞的药效实验，在显微镜下观察细胞病变效应、再用实时荧光定量PCR检测萃取的部位是否对HIV的细胞内HIVRNA相对量和上清中的病毒载量具有抑制作用。统计学方法为先将定量PCR运行后的文件用ABI7300定量PCR仪所携带的软件进行分析，采用Excel建立数据库。之后使用SPSS17.0统计软件进行统计分析，检验方法采用单向方差分析，假如方差齐则使用LSD法分析，若方差不齐则使用Kruskal-Wallis H方法分析，检验标准为α=0.05。制图软件选用GraphPad Prism5.0。
　　结果:
　　萃取得到石见穿的粗提物，经体外细胞感染HIV药效实验表明:从不同部位的不同浓度给药组中，石见穿氯仿部位浓度为20μg/ml的细胞内HIVRNA相对量明显较病毒对照组低（P＜0.05），且与阳性对照组比较（P=0.128＞0.05），说明浓度为20μg/ml时与阳性对照组相比无差异，同时，其上清中病毒载量明显低于病毒对照组（P＜0.05），与阳性对照组相比（P=0.611＞0.05），说明上清浓度为20μg/ml时与阳性对照组相比也无差异。将石见穿有效粗提取部位通过硅胶柱色谱洗脱，薄层色谱分析，香草醛显色，以及高效液相色谱仪制备，核磁共振鉴定结构分离出抗HIV有效化合物22-23流份黄绿色粉末为熊果酸。石见穿的氯仿部位提取分离经体外药效实验显示22-23流份，5-6流份有效;RT-PCR结果表明给药组石见穿氯仿部位分离得到的22-23流份、5-6流份细胞内HIVRNA相对量明显较病毒对照组低（P＜0.05），且与阳性对照组比较（P＞0.05），同时，其上清中病毒载量明显低于病毒对照组（P＜0.05），与阳性对照组相比（P＞0.05）说明与阳性对照组相比无差异。
　　结论:
　　石见穿氯仿部位对HIV-1具有抑制作用，石见穿氯仿部位分离物得到的22-23流份即熊果酸，5-6流份为抗HIV作用的主要有效化合物。