厚壳贻贝脱脂粉蛋白提取、脱腥及其降血压活性肽制备研究

厚壳贻贝(Mytilus coruscus)是我国浅海大面积养殖的主要贻贝品种之一，含有丰富的蛋白质、必需氨基酸及多不饱和脂肪酸。本课题组以及国内外已有大量研究表明厚壳贻贝油脂具有抗炎作用，因此对其脂溶性成分萃取制备抗炎药物是对贻贝资源有效利用途径之一。本研究是以厚壳贻贝冻干粉经超临界萃取油脂成分所得的副产品为试验材料，研究其蛋白质的提取工艺、脱腥方法以及从中制备具有降血压活性的生物活性肽，同时将其与植物性蛋白中已被验证可以用于制备高降血压活性生物肽的黄豌豆(Pisum sativum L)蛋白进行比较，其主要研究结果如下：
　　 1.厚壳贻贝经超临界萃取油脂后得到的贻贝脱脂粉具有较高的蛋白含量，可达47.4％，通过单因素试验及正交试验可以初步确定厚壳贻贝脱脂粉蛋白的等电点沉淀法提取工艺，在浸提料液比1:20，浸提pH=12，浸提温度40℃，浸提时间50 min，提取得到的厚壳贻贝分离蛋白的蛋白含量为84.9%(干重)，灰分含量13.1%，脂肪含量0.9%。对得到的厚壳贻贝分离蛋白进行透析处理可有效降低其灰分含量，提高蛋白质含量。厚壳贻贝蛋白的氨基酸组成在等电点沉淀法提取以及透析处理后没有显著的变化。
　　 2.由于碱法工艺提取得到的贻贝分离蛋白呈棕褐色，异味较重，加上贻贝粉本身特有的鲜腥味，影响了贻贝蛋白的感官价值，因而需要对厚壳贻贝粉蛋白的提取工艺进行改进，同时对其腥味进行脱除处理。因此对厚壳贻贝脱脂粉采用体积比2:1乙醇水溶液在高速均质的条件下重复萃取3次可以起到较好的脱腥效果，同时残留的酒精气味较少，对蛋白质的损失较少，可以作为厚壳贻贝粉蛋白提取前的脱腥处理。
　　 3.酸碱浸提对厚壳贻贝粉蛋白提取物的蛋白质含量没有较大差异，但酸溶法得到的提取物没有异味，同时可以减弱部分腥味。经乙醇溶液萃取脱腥后，酸溶浸提等到的贻贝蛋白腥味较低。乙醇溶液萃取脱腥后，在酸溶提取过程中柠檬酸和氯化钙的加入可进一步去除贻贝中的腥味和异味，提高蛋白质含量，得到的贻贝分离蛋白蛋白质含量可达到90%以上，并且色泽好，气味淡。
　　 4.采用双酶酶解和体外模拟胃肠道酶酶解对贻贝蛋白及黄豌豆蛋白均具有较好的水解度，其中胃肠道消化酶对贻贝蛋白的水解度最高，达到80%以上。贻贝蛋白对风味蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶及胃肠道消化酶的特异性高于豌豆蛋白。
　　 5.贻贝蛋白和黄豌豆蛋白的酶解产物对血管紧张素肽转移酶(ACE)均具有抑制作用，其中胃肠道消化酶酶解产物对ACE的抑制活性最高，其IC50分别为215μg/mL和195μg/mL，风味蛋白酶碱性蛋白酶的酶解物的ACE抑制活性最低。胃肠道消化酶酶解可以作为制备厚壳贻贝蛋白降血压肽的一种有效途径。
　　 6.柠檬酸和氯化钙辅助脱腥提取得到的贻贝蛋白得到的酶解物的水解度以及对ACE的抑制活性和贻贝蛋白接近，表明柠檬酸和氯化钙的加入对酶解贻贝蛋白制备降血压肽没有显著影响。而柠檬酸和氯化钙的加入可以减弱贻贝蛋白的腥味、提高提取物蛋白的含量，因此柠檬酸和氯化钙可以作为厚壳贻贝脱脂粉蛋白提取的辅助材料。