基因Z对口腔鳞状细胞癌细胞的生物学影响

口腔鳞状细胞癌是口腔颌面部最常见的肿瘤之一，吸烟、饮酒及白斑恶变等都是其常见病因，因发病率在近年来连年上升且预后不理想等原因成为威胁人类健康的难题。临床上多以手术治疗结合放射疗法化学疗法对口腔鳞状细胞癌进行治疗，但由于容易发生淋巴结转移往往出现复发。越来越多的专家学者致力于这一疾病的研究，目的是探索其确切的发病机制，在了解其发病机制的基础上寻找能够预测其发生的特异性肿瘤标志物以便能在肿瘤发生的早期进行诊断，早发现早治疗，提高术后生存率，或者可以探寻到针对口腔鳞状细胞癌的有效治疗靶点，成功应用于临床，提高患者生活质量。我们期望能通过本次实验探索基因 Z在口腔鳞状细胞癌中的具体作用，为其机制研究及基因治疗靶点寻找提供新的线索。目的：通过构建慢病毒表达载体在口腔鳞状细胞癌细胞中实现基因Z的表达改变，并研究基因 Z对该细胞增殖及迁移等生物学行为的影响，从而探索基因 Z在口腔鳞状细胞癌发病过程中的作用，为明确其发病机制和寻找肿瘤标志物及治疗靶点提供线索和方向。
　　方法：本次实验我们构建基因 Z高表达及敲降慢病毒表达载体质粒，并将其包装成慢病毒颗粒感染口腔鳞状细胞癌细胞，经嘌呤霉素筛选后建立该细胞的基因 Z稳定转染细胞系。采用Real time PCR实验及Western Blot实验验证该稳定转染细胞系中基因Z在mRNA及蛋白水平的表达变化情况。采用实时无标记细胞功能分析仪进行生长曲线的测定检测基因 Z对细胞增殖能力的影响，采用transwell迁移实验检测基因Z对细胞体外迁移能力的影响。通过Western Blot实验检测各组基因Z稳定转染细胞系中表皮生长因子受体EGFR的表达变化情况。
　　结果：基因 Z高表达及敲降慢病毒载体质粒构建成功，慢病毒颗粒包装完成后用其感染口腔鳞状细胞癌细胞，经筛选后得到基因 Z的高表达及敲降稳定转染细胞系，经Real time PCR实验及Western Blot实验验证，基因Z在该细胞中的mRNA及蛋白水平均有明显的升高与降低，说明口腔鳞状细胞癌的基因 Z高表达及敲降稳定转染细胞系建立成功。并且当基因 Z高表达时，该细胞的生长速度及细胞迁移数目明显高于对照组（P<0.001），生长因子受体EGFR的表达水平也高于对照组。而当基因 Z的表达下调时，该细胞的生长速度及细胞迁移数目明显低于对照组(P<0.001)。生长因子受体EGFR的表达水平同样也低于对照组。
　　结论：基因 Z的高表达促进了口腔鳞状细胞癌的增殖能力及迁移能力，而基因 Z的表达下调则抑制了该细胞的增殖能力与迁移能力，表明基因 Z可能在口腔鳞状细胞癌的发生发展过程中起着重要作用，这将为进一步探索其发病的分子机制奠定基础。并且当基因Z表达发生变化时，EGFR的表达也随之发生正相关性的变化，说明基因Z可能与EGFR协同作用参与细胞增殖的调节，为进一步寻找肿瘤标志物与临床治疗靶点提供了科学依据与线索。