IGFBP7基因多态性与结直肠癌发病风险的关联研究

目的:胰岛素样生长因子结合蛋白7(IGFBP7)是胰岛素样生长因子结合蛋白超家族(IGFBPs)中的一员。最初是因其在脑脊膜瘤中差异表达而被克隆出来。其在人体正常器官组织及多种肿瘤组织中均有表达，并参与组织细胞的增殖、分化、衰老、凋亡等过程。本实验通过病例-对照研究，讨论IGFBP7上rs11133472和rs1718848两个位点的基因多态性与结直肠癌(Colorectal Cancer CRC)发病之间的关系，以求为结直肠癌的筛查和诊断提供新的标志物，为预防、干预结直肠癌提供理论依据。
　　方法:本实验共选取2012年2月-2014年2月，就诊于河北医科大学第四医院病人，其中结肠癌病人68例，直肠癌病人143例，正常人群132例，本实验采用病例-对照研究。对于符合本实验条件的对象在其知情同意的情况下，采集静脉血5ml，同时还收集患者年龄、性别、吸烟史、饮酒史等一般情况和家族性肿瘤疾病史等信息。采用蛋白酶K消化-饱和氯化钠盐析法提取白细胞中DNA，采用聚合酶链反应-连接酶检测反应(Polymerase Chain Reaction-ligase detection reaction, PCR-LDR)方法对IGFBP7基因的rs11133472、rs1718848两个单核苷酸多态性(SNP)位点等位基因及基因型进行分析。
　　实验结果使用SPSS13.0版软件包(SPSS Company，Chicago，Illinois，USA)进行统计学分析。对直肠癌组、结肠癌组和正常对照组年龄之间差异进行t检验;并分别对两组的性别差异、等位基因分布频率及基因型分布频率进行x2检验。并利用Hardy-Weinberg对三个组别基因型频率的分布进行连锁平衡分析。使用logistic回归方法计算相对风险度的比值比(oddsratio，OR)取95％可信区间(confidence interval，CI)。采用EH软件和2LD软件对IGFBP7基因rs11133472A/G、rs1718848A/G两个SNPs位点进行联合分析，以P＜0.05作为有显著性差异的标准。
　　结果:
　　1对照组中rs11133472A/G、rs1718848A/G两个位点的基因型频率分布均符合Hardy-Weinberg平衡(P＞0.05)。
　　2 rs11133472A/G基因多态性与结直肠癌发病风险的相关性分析
　　IGFBP7基因rs11133472A/G位点上等位基因A和G在直肠癌组中出现频率为5.9％和94.1％;在结肠癌组中出现频率为6.6％和93.4％;在正常对照组中的频率为2.3％和97.8％。直肠癌组及结肠癌组分别与正常对照组相比，差异均具有统计学意义（P分别为0.032和0.030）。在直肠癌组中GG、AG两种基因型出现的频率分别88.1％和11.9％;结肠癌组中GG、AG两种基因型出现的频率分别86.8％和13.2％;在正常对照组中分别为95.5％和4.5％。直肠癌组及结肠癌组分别与正常对照组相比，差异均具有统计学意义（P分别为0.028和0.027）。与携带GG基因型相比，携带AG基因型可增加结直肠癌的发病风险(OR=2.833，95％CI=1.082-7.421; OR=3.203,95％CI=1.090-9.417)。
　　3 rs1718848A/G基因多态性与结直肠癌发病风险的相关性分析
　　IGFBP7基因rs1718848A/G位点上等位基因A和G在直肠癌组中出现频率为11.9％和88.1％;在结肠癌组中出现频率为12.5％和87.5％;在正常对照组中为6.4％和93.6％。直肠癌组及结肠癌组分别与正常对照组相比较，差异均具有统计学意义（P分别为0.028和0.040）。在直肠癌中GG、AG两种基因型出现的频率分别为76.2％和23.8％;在结肠癌中分别为75.0％和25.0％;而在正常对照组中则为87.1％和12.9％。直肠癌组及结肠癌在分别与正常对照组对比较，差异均有统计学意义（P分别为0.020和0.031）。与携带GG基因型相比，携带AG基因型可增加结直肠癌的发病风险(OR=2.110，95％CI=1.114-3.995; OR=2.255，95％CI=1.066-4.768)。
　　4采用EH软件和2LD软件对IGFBP7基因rs11133472A/G和rs1718848A/GSNPs位点进行联合分析。
　　4.1在直肠癌组与正常对照组中IGFBP7基因rs1133472A/G与rs1718848A/G两位点间存在连锁不平衡。单体型rs11133472G-rs1718848G是最多见的，在正常对照组中和直肠癌组中的频率分别为84.8％，67.8％;rs11133472G-1718848A频率分别为10.6％，20.3％; rs11133472A-rs1718848G频率分别为2.3％，9.8％、rs11133472A-1718848A频率为2.3％，2.1％。通过(Table5)可以看出，人群中rs11133472G-1718848A单体型、rs11133472A-1718848G单体型、rs11133472A-171884A单体型，均可增加直肠癌的发病风险。其OR值及95％可信区间分别为:1.365(1.109～3.449)、1.250(1.092～3.075)及1.946(1.306～4.914)。rs11133472G-1718848G单体型OR值及95％可信区间为:0.735(0.416～1.820)。提示此种单体型可能与结肠癌的发病风险无关。
　　4.2对于结肠癌组与正常对照组中IGFBP7基因rs1133472A/G与rs1718848A/G两位点间存在连锁不平衡，单体型rs11133472G-rs1718848G频率最高，在正常对照组中和结肠癌组中的频率分别为75.0％，64.7％;其次分别为rs11133472G-1718848A(19.3％，22.1％); rs11133472A-rs1718848G(3.8％,10.3％)、rs11133472A-1718848A(1.9％,2.9％)。人群中rs11133472G-1718848A单体型、rs11133472A-1718848G单体型、rs11133472A-171884A单体型，均能够增加直肠癌的发病风险，其OR值及95％可信区间分别为:1.261(1.142-3.062)、1.132((1.061-2.854)及1.932(1.406～4.736)。而rs11133472G-1718848G单体型OR值及95％可信区间为:0.763(0.326-1.164)。提示此单体型可能与结肠癌的发病风险无关。
　　结论:
　　1 IGFBP7 rs11133472AG、rs1718848AG基因型增加结直肠癌患病风险。rs11133472GG和rs17188484GG基因型可能与结直肠癌的发病风险无关。
　　2 IGFBP7基因启动子区域rs11133472和rs1718848 SNPs位点间存在连锁不平衡。rs11133472与rs1718848 SNPs位点联合分析，携带rs11133472和rs1718848任一突变基因型时，结直肠癌的患病风险都会增加。