骨肉瘤组织中CD147、MMP-2的表达和意义

骨肉瘤(osteosarcoma)是一种原发的、高度恶性的肿瘤,它来源于间叶组织,好发于20岁以下的青少年男性和儿童,多位于长管状骨的干骺端,早期易发生转移,临床上病死率极高,严重危害青少年健康。在20世纪70年代以前,放疗甚至截肢或是治疗骨肉瘤的主要方法,虽然暂时能在局部控制骨肉瘤的而发展,但据统计,经过治疗后出现远离部位的转移的患者高达80％,综合生存率仅有20%左右;到了80年代,新辅助化疗(neoadjuvantchemotherpy)概念问世,主张活检确立骨肉瘤诊断后立即实行化疗方案,同时依据肿瘤坏死率指导术后化疗方案;近30年来,随着新辅助化疗的不断改善和广泛应用,骨肉瘤的5年生存率达到60%左右。现在的主要治疗观念是:国内外在骨肉瘤的综合治疗中,手术切除仍是主要治疗手段,根据病情的不同可行保肢手术,同时辅助有效的化疗方案,二者联合临床应用能显著改善骨肉瘤患者预后。
　　虽然近两年来手术切除加辅助化疗技术有不断的发展,有效的降低了骨肉瘤的病死率,然而仍然有30﹪左右患者在就诊时甚至在治疗的过程中会出现转移或复发,一旦诊断发生远处转移后,患者的5年生存率只有20-30﹪;肿瘤细胞对化疗药物产生耐药性;化疗过程中所用的药物如顺铂、卡铂、氨甲蝶呤、环磷酰胺、糖皮质激素、紫杉类和长春新碱可引起不同程度的糖耐量异常,甚至诱发糖尿病,使化疗不能如期进行,影响患者的治疗效果和生存质量。这些因素导致在临床上能够应用的多种手段的治疗失败。人们对骨肉瘤的治疗已经转到了基因领域,己探索应用反义基因、抑癌基因、免疫基因、靶向基因、自杀基因等综合治疗,这种肿瘤基因治疗方法很富有发展前景,成为了目前肿瘤临床研究的热门。
　　CD147即细胞外基质金属蛋白酶诱导因子（extracellular metalloproteinases inducer,EMMPRIN),能刺激肿瘤周围的纤维母细胞产生 MMPs,为肿瘤的侵润与转移创造有利条件,它是一种细胞表面粘附分子,目前有研究发现 CD147与肿瘤血管形成有密切的关系,认为CD147可促进肿瘤血管形成,为肿瘤细胞的增殖和转移创造条件。有研究发现CD147和MMP-2在多种恶性肿瘤组织中表达率增高,与肿瘤转移与浸润关系密切,并在血管的形成过程中发挥着一定作用,与肿瘤的病理分期和预后密切相关。
　　目的:
　　本研究通过测定 CD147和MMP-2在骨肉瘤组织中的表达,以探讨二者在骨肉瘤发生、侵袭及转移中作用,并分析二者间的相互联系,以确定共同检测 CD147及 MMP-2是否成为判断骨肉瘤预后的新指标。
　　方法:
　　标本的采集和处理:
　　收集2003年l月-2013年5月,承德医学院附属医院、保定市第二医院、河北医科大学第三医院手术切除的骨肉瘤标本37例,骨软骨瘤标本10例,均经两位临床病理医师验证。所收集组织用4%的中性甲醛浸泡,清水冲洗,100%,90%,75%的梯度酒精脱水,二甲苯透明,石蜡包埋。连续石蜡切片,厚度为0.5um。
　　分组:
　　将收集得得组织标本分为骨肉瘤组(37例)、骨软骨瘤组(10例);将骨肉瘤组按照性别分为男(20)、女(17)两组,按照组织分型分为骨母细胞型(17)、纤维母细胞型(7)、软骨母细胞型(9)、其他(4);按照Enneking外科分期法分为Ⅰ期(4)、Ⅱa期(7)、Ⅱb期(14)、Ⅲ期(12),按照有无肺转移分为两组:有肺转移组(23),无肺转移组(14)。
　　实验方法:
　　应用免疫组织化学S-P法,分别检测37例骨肉瘤组织、10例骨软骨瘤组织进行免疫标记,对两组中 CD147及 MMP-2的表达情况进行统计学分析。
　　镜下结果评价:
　　每个切片随机挑选5个视野,将免疫组化结果根据染色程度及阳性细胞百分数进行评分,以染色程度得分和阳性细胞百分数得分的乘积计算总分。
　　统计学分析:
　　应用SPSS17.0统计软件进行统计处理,样本率的比较采用卡方检验,P<0.05说明差异有统计学意义。MMP-2、CD147之间的相关性采用Spearman检验,P<0.05说明差异有统计学意义。
　　结果:
　　1.免疫组化结果显示:CD147、MMP-2阳性产物位于骨肉瘤细胞的胞膜和胞浆,为棕黄色颗粒样物,间质及正常组织中无或有少量着色。CD147在骨肉瘤中的阳性表达率高达89.2%,而对照组的骨软骨瘤的阳性率为0,差异具有显著性,(P<0.01)。MMP-2在骨肉瘤中的阳性表达率达78.4%,而对照组的骨软骨瘤的阳性率仅为20%,两者相比差异具有统计学意义,(P<0.05)。
　　2.CD147、MMP-2在骨肉瘤细胞中的阳性表达与年龄、性别和Dahlin组织分型无关(P>0.05)。二者的阳性表达与骨肉瘤Enneking临床分期和有无肺转移有关（P<0.01):随骨肉瘤临床分期的增加,CD147及MMP-2的阳性表达率也逐渐升高;有肺转移组CD147和MMP-2的阳性表达明显高于无肺转移组。
　　3.骨肉瘤中,CD147与 MMP-2的表达有一定的相关性,呈正相关(r=0.451,P<0.01)。
　　结论:
　　1.骨软骨瘤中基本不表达CD147,骨肉瘤组中的CD147、MMP-2阳性表达率显著高于骨软骨瘤组,并且随着肿瘤Enneking临床分期的增高,CD147及 MMP-2的阳性表达水平也升高;且有肺转移组的骨肉瘤患者CD147、MMP-2的阳性表达率明显高于无肺转移组的,说明二者的表达与骨肉瘤的转移和恶性程度有关。
　　2.骨肉瘤中CD147和MMP-2的表达呈正相关,二者的强阳性均与肿瘤的转移率高密切相关,预后较差,提示二者在肿瘤的发生发展中具有协同作用,联合检测CD147及MMP-2有可能成为初期检测骨肉瘤和评估骨肉瘤预后的重要指标。