葡萄酒渣中白藜芦醇的提取、纯化及体外生物活性研究

本实验以生产酿造葡萄酒的副产物-葡萄酒渣为原料，就葡萄酒渣中具有多种生物学功能的物质白藜芦醇，对其提取、纯化及体外活性进行了较为系统的研究，旨在考察葡萄酒渣开发利用的科学合理性。主要研究结果如下：
　　 (1)采用纤维素酶法辅助提取葡萄酒渣中白藜芦醇，在单因素实验的基础上，利用四因素三水平的Box-Behnken试验设计方案，研究了酶添加量、酶解时间、酶解温度、酶解pH值对提取葡萄酒渣中白藜芦醇的影响，通过Design-Expert7.0软件建立回归方程模型并进行响应面分析，确定酶法提取的最佳条件为：酶添加量5U/g底物，酶解时间102.96min，酶解温度52.34℃，酶解pH值4.79，在此条件下，白藜芦醇提取量达516.53 ug/g，通过与原料未经酶解处理的直接醇提取法相比，可以得出酶法提取明显优于直接醇提法的结论。
　　 (2)采用大孔树脂法对白藜芦醇进行了纯化研究，选用NKA-9型大孔树脂来分离纯化白藜芦醇：在上样pH为4、上样速度为１mL/min时，吸附最佳，100 min左右基本完成对白藜芦醇的吸附；对吸附后的NKA-9型大孔树脂采用75％的乙醇溶液洗脱，以洗脱流速lmL/min进行解吸，大约消耗200 mL的解吸剂能把白藜芦醇解吸下来。该工艺生产的白藜芦醇纯度达到26.03％。
　　 (3)采用酶促动力学方法对白藜芦醇体外抑制酪氨酸酶单酚酶、二酚酶活性进行了研究，结果表明：白藜芦醇对酪氨酸酶单酚酶和二酚酶均有抑制作用，对抑制单酚酶、二酚酶活性的IC50值分别约为5.1 mg/mL和5.6 mg/mL。对酪氨酸酶二酚酶的抑制作用表现为混合型抑制，对游离酶的抑制常数(K1)为3.35 mg/mL，对酶-底物络合物的抑制常数(K1s)为35.98 mg/mL。
　　 (4)对白藜芦醇体外抑制血小板聚集作用进行初步分析，结果表明白藜芦醇在体外对ADP诱导的血小板聚集具有一定的抑制作用，且抑制能力依赖于白藜芦醇的浓度。在本实验中所用的浓度范围内(0.0125 mg/mL-0.10 mg/mL)，浓度越大，抑制作用越强，IC50值约为0.046 mg/mL。