白念珠菌蛋白激酶Gin4的功能与结构分析

白念珠菌是一种条件性致病真菌，寄存在人体内，与健康菌群共生，但在一些情况下，会引起疾病。我们主要研究白念珠菌一些基因功能及其结构。
　　Gin4蛋白属于NIM1蛋白激酶家族，是非常重要的细胞周期调节器。GIN4基因主要分为N端激酶区和C端非激酶区，激酶区功能及结构已被研究非常通透;但对于C端的研究比较少。根据一些研究，发现该基因有三个不同的结合域:脂质结合域(LBD)，隔膜蛋白结合域(SBD)和核仁结合域(NAD)。隔膜蛋白结合域(SBD)是Gin4蛋白功能中一项必不可少的结构域，我们本次实验主要研究该区域功能。我们将要研究区域截取几段，与不同标签载体连接，之后利用不同标签特异性吸附达到初步纯化目的，再利用离子交换、分子筛等方法获得纯度较高，均一性较好的蛋白。最后，将得到目的蛋白，利用蛋白晶体初筛试剂盒初筛蛋白晶体，再在此基础上优化，使之得到想要的蛋白结构。
　　蛋白功能方面，本次实验主要涉及了4个蛋白，分别是Gin4蛋白，Sec15蛋白，Bem1蛋白，Rsr1蛋白。在酿酒酵母中，SEC15基因和众多基因一起组成胞吐复合物结构，在营养吸收，与外界环境沟通，分裂和维护细胞基本形状是至关重要。Rsr1蛋白是一种GTP酶，是一种芽位点蛋白，是一种Ras超家族中一员。Bem1蛋白在细胞极性和出芽功能方面存在作用，Gin4蛋白是一种隔膜蛋白相关蛋白，在细胞分离方面起作用。这几个蛋白在白念珠菌中都有表达，且与极性有关。本次实验主要通过蛋白之间体外相互作用，即利用标签抗体特异性，通过WesternBlot方法验证它们之间关系。
　　结果表明，Gin4蛋白C端与Bem1蛋白作用，而Bem1蛋白N端与Sec15蛋白C端作用。Sec15蛋白也与Rsr1蛋白有作用。