金氏真蛇尾(Ophiura kinbergi)皂苷的制备及其生物活性研究

本论文以采自烟台崆峒岛海域的金氏真蛇尾（Ophiura kinbergi）作为原材料，提取了其中的活性物质皂苷，然后探究了什么样的条件下才能有最大提取率，然后将分离纯化后的金氏真蛇尾皂苷进行最基本物理化学方面的研究，并进一步研究了金氏真蛇尾皂苷的抗氧化活性、抑菌活性和抗肿瘤活性。随后对已提取过皂苷的金氏真蛇尾残渣进行处理，从中提取金氏真蛇尾多糖，并进一步探究其抗氧化活性和抑菌活性。
　　在对金氏真蛇尾皂苷的最佳提取工艺研究中，采用了单因素实验和正交试验两种方法，结果表明，金氏真蛇尾皂苷的最佳提取条件为：采用体积分数为85％的乙醇溶液作为浸提液，提取温度为60℃，料液比（m/V）为1:40，重复提取3次，每次提取3小时。
　　采用溶剂（85%的乙醇溶液）浸提法得到金氏真蛇尾粗皂苷，将粗皂苷过AB-8大孔树脂以分离除去部分多糖、无机盐和色素，并用洗脱液（去离子水、体积分数为20%的乙醇溶液、40%的乙醇溶液、60%的乙醇溶液、80%的乙醇溶液）依次洗脱，并收集各个洗脱组分。随后将80%的乙醇溶液洗脱组分进行硅胶柱层析和薄层层析。
　　皂苷种类的鉴定结果表明金氏真蛇尾皂苷为甾体皂苷；然后将其置于200-800nm的紫外波长范围内进行扫描，并与标准皂苷进行比较，结果为在215nm处有最大吸收峰。并测定其熔点范围为241～256℃。
　　通过测定金氏真蛇尾皂苷的总还原力和对氧自由基（羟基自由基和超氧阴离子）的清除作用来测定其抗氧化活性，结果为：金氏真蛇尾皂苷的总还原力OD值为1.403，此结果表明金氏真蛇尾皂苷具有一定的抗氧化活性，且金氏真蛇尾皂苷对氧自由基有抑制作用。
　　采用滤纸片法和最低抑菌浓度法（MIC）来测定金氏真蛇尾皂苷的对大肠杆菌(Escherichia coli)、啤酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae Hansen)、青霉(Penicillium glaucum)和金黄色葡萄球菌(Staphyloccocus aureusRosenbach)的抑制作用。结果表明金氏真蛇尾皂苷对此四种受试菌的抑菌圈大小分别为：大肠杆菌最大为16.4mm，金黄色葡萄球菌和啤酒酵母菌次之分别为12.5mm和12.2mm，青霉最弱为10.8mm。金氏真蛇尾皂苷对此四种受试菌的MIC依次为：1.0mg/mL、1.0mg/mL、2.0mg/mL和4.0mg/mL。
　　金氏真蛇尾皂苷的抗肿瘤活性主要针对HL-60细胞（白血病细胞）和SK细胞（神经胶质瘤细胞）采用SRB法进行研究。结果表明，金氏真蛇尾皂苷对HL-60细胞在100μg/mL时有最大抑制率为28.7%，对SK细胞在100μg/mL时有最大抑制率为26.4%。鉴于以上实验结果，我们建议将金氏真蛇尾皂苷往保健品方向发展。
　　为了更大限度的利用金氏真蛇尾资源，又从金氏真蛇尾残渣中提取得到了粗多糖。采用碱提法得金氏真蛇尾多糖，采用苯酚-硫酸法，测得金氏真蛇尾多糖的标准曲线回归方程为y=0.4455x+0.0047(相关系数R2=0.9967)，多糖含量为3.18%；单糖测定结果为多糖中含游离性单糖；而碘-碘化钾反应的结果是阴性，表明金氏真蛇尾多糖是非淀粉多糖。
　　金氏真蛇尾多糖的抗氧化活性测定与其皂苷的抗氧化活性测定相一致，实验测得金氏真蛇尾多糖的总还原力OD值为1.145，表明其具有一定的抗氧化活性；且金氏真蛇尾多糖对氧自由基有抑制作用。
　　金氏真蛇尾多糖的抑菌活性测定同样也是采用滤纸片法测定其抑菌圈大小和MIC法测定其最低抑菌浓度。其抑菌圈大小测定结果为：大肠杆菌为13.46mm，金黄色葡萄球菌为14.12mm，啤酒酵母菌为14.73mm，但其对青霉则没有抑制作用。MIC的测定结果为:金黄色葡萄球菌和啤酒酵母菌均为1.0mg/mL，大肠杆菌为2.0mg/mL，而对青霉则没有抑制作用。