基于SSR标记的葡萄品种鉴定及葡萄脱毒种苗遗传稳定性研究

针对葡萄种苗早期形态学鉴定难度较大，葡萄通过茎尖超低温脱毒处理后的再生植株存在变异的可能性等问题，本研究在葡萄SSR反应体系的基础上进行了优化，并利用SSR分子标记技术对酿酒葡萄品种进行了品种鉴定和脱毒种苗的遗传稳定性分析。利用SSR分子标记分析了宁夏栽培的14个酿酒葡萄品种的亲缘关系，筛选的不同引物及组合可满足对这14个葡萄品种进行品种鉴定的要求;分析了4种经过超低温脱毒处理后种苗的遗传稳定性，为酿酒葡萄品种早期鉴定以及脱毒种苗遗传稳定性研究提供了参考依据。主要研究结果如下：
　　1.优化了适合葡萄SSR反应的体系为:模板DNA的量为10 ng-30 ng，Mg2+浓度为3.0mmol·L-1，dNTP浓度为0.10 mmol·L-1，TaqDNA聚合酶的量为1.0U，引物浓度为0.2μmol·L-1，总体积为10μL，剩下的用ddH2O补充;确定了适合葡萄SSR反应扩增程序为:94℃预变性5 min;94℃变性30s，54℃-64℃（不同引物有差别）退火30s，72℃延伸1min（循环35次）;72℃延伸10min。
　　2.从110对引物中筛选出可以稳定扩增且多态性高的10对引物，并利用已筛选出的引物对14个酿酒葡萄品种进行了检测，共检测到等位基因74个，平均每对引物检测到等位基因数为7.4个，扩增谱带最多的引物是SP0102，谱带数为11条。通过UPGMA聚类分析能够将14种葡萄种质聚为三大类，第一大类只含有一个品种Traminette。第二大类共包含2个品种，为黑比诺和Cayuga White，第三大类包含剩下的11个品种。
　　3.通过SSR标记技术，并利用NTSYSpc Version2.10e软件的分析，根据引物的鉴别效率，筛选出最为高效引物SP0097，对14个待测品种均能扩增出多态性谱带，可以一次就将14个品种区分开来，另外利用其余9对引物组合出23组也可以鉴别出14个品种，大大提高了品种鉴定的准确性。
　　4.利用110对SSR引物对4种经过超低温脱毒的种苗进行了稳定性检测，结果表明脱毒种苗脱毒前后扩增出来的谱带完全一致，未检测出遗传变异，表明经过超低温脱毒处理后的再生试管苗的遗传稳定性良好。