硒蛋白W对鸡肝脏细胞凋亡影响的研究

硒蛋白W(SelW)是硒蛋白家族一员，在多种动物的不同组织中均有表达，其中肝脏中的表达较多。氧化应激能够引起肝脏的损伤，如肝硬化、脂肪肝、酒精肝等。目前鸡SelW被证明具有抗氧化的作用，然而SelW在中的作用机制仍不清楚。因此本实验在复制缺硒鸡模型与建立体外培养鸡原代肝细胞SelW敲低与过表达模型的基础上，采用实时荧光定量PCR(qPCR)技术，分别检测SelW、调亡因子（P53、caspase-3、Bax、Bak-1、Bcl-2）mRNA以及炎症因子（cox-2、PTGEs、TNF-α、iNOS、NF-κB）mRNA和细胞因子(IL-1、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-17、IFN-γ)mRNA; Western blot法检测了cox-2、PTGEs、NF-κB、SelW基因蛋白的表达变化量;TUNEL法检测了细胞凋亡的程度，结果表明:
　　 1.本实验成功建立鸡原代肝细胞SelW敲低和过表达模型。成功将pcDNA3.1/SelW转染到肝脏原代细胞中的最适条件是六孔板每孔加入8μL转染试剂和2μg的表达载体;将StealthRNA(S-RNA)转染到鸡肝脏原代细胞中的最适条件是六孔板每孔加入0.9μL S-RNA+1.5μLRNAiMAX。过表达细胞中SelW的含量比正常组中高2000多倍，敲低组中SelW的表达量为正常组的50％左右。
　　 2.鸡缺硒组中，肝脏P53、caspase-3、Bax、Bak-1 mRNA的表达量增加，而Bcl-2 mRNA的表达随着时间的推移呈现先升高后降低的趋势;在体外，细胞过表达SelW时，P53、caspase-3、Bax、Bak-1 mRNA的表达量比对照组低，而Bcl-2的表达量高，而细胞敲低SelW组中，P53、caspase-3、Bax、Bak-1 mRNA的表达量增加，Bcl-2 mRNA的表达量降低，并且细胞的凋亡率明显低于沉默组。表明SelW能够抑制促凋亡因子的产生，促进抗凋亡因子的表达，从而保护肝脏免受氧化应激导致的凋亡损伤。
　　 3.鸡缺硒组中，肝脏cox-2、PTGEs、TNF-α、iNOS及NF-κB mRNA的表达量比对照组中高，并且cox-2、PTGEs及NF-κB蛋白的表达量也一致;在体外，细胞过表达SelW时，cox-2、PTGEs、TNF-α、iNOS及NF-κB mRNA的表达量比对照组低，并且cox-2、PTGEs、NF-κB蛋白的表达量也降低，而细胞敲低SelW组中，cox-2、PTGEs、TNF-α、 iNOS及NF-κBmRNA的表达量升高，其蛋白检测结果一致。证明SelW能够抑制炎症因子的表达。
　　 4.鸡缺硒组中，肝脏细胞因子IL-1、IL-6、IL-8及IL-17 mRNA的表达量比对照组高，而IL-4和IL-10 mRNA的表达量随着时间的增加呈现降低的趋势，IFN-γ mRNA的表达量是降低的;在体外，细胞过表达SelW时，在鸡肝脏细胞中IL-1、IL-6、IL-8及IL-17的表达量比对照组低，而IL-4和IL-10 mRNA的表达量随着时间的增加呈现升高的趋势，IFN-γ mRNA的表达量是升高的，而细胞敲低SelW组中的结果与缺硒组结果一致。证实鸡SelW能够通过调节细胞因子的表达，提高肝脏免疫功能。