血管周围脂肪在糖尿病大鼠血管内皮损伤修复中的作用及机制研究

本文主要从以下几部分进行论述：
　　第一部分 3T3-L1前脂肪细胞向成熟脂肪细胞诱导分化的方法研究
　　目的：观察诱导剂作用时间对3T3-L1前脂肪细胞系分化的影响。方法：参照传统“鸡尾酒”法，分别在作用时间为2（传统法）、3、4天（后两者称改良法）条件下诱导分化。倒置显微镜观察细胞形态，油红O染色及甘油三酯检测脂肪含量。结果：传统法脂肪细胞转化率大于80％者占65％，而改良法转化率大于80％者为100％(P＜0.05)。4天组细胞脂肪含量高于2、3天组(1402.5±9.4 vs.1078.5±15.2或1083.4±9，6 ng/mL，P＜0.05)，而2与3天组间无明显区别(1078.5±15.2 vs.1083.4±9.6 ng/mL，P＞0.05)。结论：改良法3T3-L1前脂肪细胞诱导法可提高脂肪细胞转化率，可作为高效制作脂肪细胞模型的方法之一。优选地，推荐作用时间为3天的改良法诱导方案。
　　第二部分 3T3-L1脂肪细胞对高糖刺激下血管内皮细胞功能的影响
　　目的：高糖可导致血管内皮细胞功能紊乱，脂肪细胞具有强大的内分泌功能，参与多种病理生理过程，该研究的主要目的是观察脂肪细胞对高糖刺激下人脐静脉内皮细胞功能的影响。方法：该实验以人脐静脉内皮细胞为研究对象，实验共分为3组:正常对照组(A)、高糖刺激组(B)、高糖刺激+3T3-L1脂肪细胞共培养组(C)。以Tubilin作为内参，采用Western blot和rt-PCR方法检测人脐静脉内皮细胞中ICAM-1、OPN、eNOS表达。结果：B组人脐静脉内皮细胞eNOS表达显著低于A组和C组(P＜0.05)，C组eNOS表达低于A组(P＜0.05)。相反，B组人脐静脉内皮细胞ICAM-1、OPN表达明显高于A组和C组(P＜0.05)，而A组和C组间ICAM-1、OPN表达无显著差异(P＞0.05)。结论：高糖刺激可导致人脐静脉内皮细胞功能紊乱，脂肪细胞可通过上调eNOS表达、下调ICAM-1、OPN表达从而减低高糖对人脐静脉内皮细胞的损害。
　　第三部分 血管周围脂肪在糖尿病大鼠血管内皮损伤修复中的作用及机制研究
　　目的：探索血管周围脂肪组织在糖尿病大鼠血管内皮损伤修复中的作用。方法：SD雄性大鼠为研究对象，实验共分为3组:空白对照组（A组）、糖尿病+颈动脉球囊损伤组（B组）、糖尿病+颈动脉球囊损伤+血管周围脂肪组织移植组（C组），采用Western Blot、rt-PCR及免疫组化技术检测大鼠颈动脉组织中ICAM-1、OPN、eNOS表达情况，同时行HE染色观察颈动脉内膜增生情况。结果：HE染色结果显示B组颈动脉内-中膜厚度明显高于A组(p＜0.05)，而C组与A组间无显著差异(p＞0.05)。Western blot、rt-PCR及免疫组化结果均显示，B组大鼠颈动脉eNOS表达显著低于A、C两组(p＜0.05)，而ICAM-1、OPN表达则显著高于A、C两组(p＜0.05)。结论：血管周围脂肪组可促进糖尿病大鼠血管内皮修复，ICAM-1及OPN有望成为糖尿病所引起血管疾病的潜在治疗靶点。