PPAR-α激动剂（非诺贝特）对NAFLD大鼠肝细胞凋亡的影响

目的：采用高脂饲料喂养SD大鼠建立NAFLD模型，观察PPAR-a激动剂（非诺贝特）对NAFLD大鼠肝细胞凋亡的影响。
　　方法：将66只雄性SD大鼠适应性喂养1周后，随机分为3组：对照组（C组，n=18），模型组（M组，n=24）和非诺贝特组（F组，n=24）。C组予普通饲料喂养，M组和F组予高脂饲料喂养。同时，F组予非诺贝特（10mg/kg/d），按1ml助溶剂溶解2mg非诺贝特的比例进行腹腔内注射给药，每日一次。C组和M组给予助溶剂（5ml/kg/d）腹腔内注射。在实验后第4、6、8周时，分别处死对照组大鼠6只、模型组大鼠8只、非诺贝特组大鼠8只，迅速完整游离出肝脏，取肝左叶同一部位约1cm×1cm×1cm组织，置于10％甲醛溶液固定待病理切片。石蜡包埋处理后，一部分常规切片后HE染色，观察肝脏脂肪变性及炎症程度；另一部分行TUNEL染色，观察肝细胞凋亡程度；以及行免疫组织化学法，检测肝组织中Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达情况。另取肝组织100mg左右放入EP管内，立即投入液氮中，后保存于-80℃冰箱内，用于检测肝组织中 PPAR-a、Bcl-2、Bax、Caspase-3mRNA的表达情况。
　　结果：4周末，与C组大鼠相比：M组大鼠肝细胞呈轻度脂肪变及气球样变，以小泡性脂肪变为主；炎症活动度计分显著升高（1.62±0.92vs0.00±0.00，P＜0.01）；肝细胞凋亡指数升高（58.86±13.59vs39.55±3.99，P＜0.05）；肝组织PPAR-amRNA和 Bcl-2 mRNA的表达量均显著降低（0.366±0.068vs0.570±0.061和0.234±0.099vs0.437±0.053，均P＜0.01）；Bax和Caspase-3 mRNA的表达量均显著升高（0.368±0.064vs0.230±0.052和0.363±0.058vs0.218±0.031；均P＜0.01）；肝组织中Bcl-2蛋白表达显著下降（0.0098±0.0002vs0.0155±0.0004，P＜0.01）；Bax和Caspase-3蛋白表达显著升高（0.1311±0.0050vs0.0947±0.0139和0.1297±0.0065vs0.0794±0.0038；均P＜0.01）。与M组大鼠比较，F组大鼠肝细胞凋亡指数降低（43.92±3.50vs58.86±13.59，P＜0.05）；肝组织 PPAR-amRNA和Bcl-2 mRNA的表达量均显著升高（0.510±0.109vs0.366±0.068和0.425±0.042vs0.234±0.099，均P＜0.01）；Bax和Caspase-3 mRNA的表达量均显著下降（0.249±0.034vs0.368±0.064和0.226±0.055vs0.363±0.058，均P＜0.01）；肝组织中Bcl-2蛋白表达显著升高（0.0148±0.0004vs0.0098±0.0002，P＜0.01）；Bax和Caspase-3蛋白表达显著下降（0.0966±0.0069vs0.1311±0.0050和0.0911±0.0136vs0.1297±0.0065；P均＜0.01）。
　　6周末，与C组大鼠相比：M组大鼠肝细胞呈轻至重度脂肪变，胞浆中出现大小不等的脂滴空泡，将细胞核挤向一侧，细胞核分布不均匀；肝组织炎症活动度计分显著升高（3.62±1.31vs0.00±0.00，P＜0.01）；肝细胞凋亡指数显著升高（74.07±3.88vs51.27±11.38，P＜0.01）；肝组织PPAR-amRNA和Bcl-2 mRNA的表达量均显著降低（0.256±0.078vs0.497±0.098和0.249±0.036vs0.452±0.065，均P＜0.01）；Bax和Caspase-3 mRNA的表达量均显著升高（0.449±0.097vs0.245±0.054和0.446±0.043 vs0.245±0.054，均P＜0.01）。肝组织中Bcl-2蛋白表达显著下降（0.0084±0.0011vs0.0176±0.0005，P＜0.01）；Bax和Caspase-3蛋白表达显著升高（0.2331±0.0230vs0.0974±0.0056和0.1680±0.0081vs0.0915±0.0063；均P＜0.01）。F组大鼠肝组织炎症活动度计分显著升高（3.12±2.90vs0.00±0.00，P＜0.01）。与M组大鼠比较，F组大鼠肝细胞凋亡指数显著降低（51.38±10.54vs74.07±3.88，P＜0.01）；肝组织PPAR-a mRNA和Bcl-2 mRNA的表达量均显著升高（0.426±0.052vs0.256±0.078和0.376±0.078vs0.249±0.036，均P＜0.01）；Bax和Caspase-3 mRNA的表达量均显著下降0.290±0.083vs0.449±0.097和0.291±0.077vs0.446±0.043，均P＜0.01）；肝组织中Bcl-2蛋白表达显著升高（0.0162±0.0010vs0.0084±0.0011，P＜0.01）；Bax和Caspase-3蛋白表达显著下降（0.1081±0.0106vs0.2331±0.0230和0.1037±0.0272vs0.1680±0.0081；P均＜0.01）。
　　8周末，与C组大鼠相比：M组大鼠肝细胞广泛肿胀，呈气球样变，可见中至重度脂肪变，以大泡性脂肪变性为主的混合性脂肪变性；肝组织炎症活动度计分显著升高（5.12±1.64vs0.00±0.00，P＜0.01）；肝细胞凋亡指数显著升高（85.10±3.54vs53.31±4.45，P＜0.01）；肝组织PPAR-a mRNA和Bcl-2 mRNA的表达量均显著降低（0.201±0.035vs0.537±0.06和0.209±0.080vs0.490±0.084，均P＜0.01）；Bax和Caspase-3 mRNA的表达量均显著升高（0.486±0.061vs0.260±0.039和0.521±0.080vs0.297±0.053，均P＜0.01）；肝组织中Bcl-2蛋白表达显著下降（0.0053±0.0002vs0.0198±0.0012，P＜0.01）；Bax和Caspase-3蛋白表达显著升高（0.2817±0.0180vs0.1106±0.0114和0.2288±0.0355vs0.1564±0.0027；均P＜0.01）。F组大鼠肝组织炎症活动度计分显著升高（3.25±1.70vs0.00±0.00，P＜0.01）；肝细胞凋亡指数升高（62.14±8.77 vs53.31±4.45，P＜0.05）；PPAR-a mRNA的表达量显著降低（0.381±0.097vs0.537±0.065，P＜0.01）；Bcl-2 mRNA表达量显著下降（0.359±0.078vs0.490±0.084，P＜0.01）；Bax和Caspase-3 mRNA的表达量均显著升高（0.354±0.051vs0.260±0.039和0.395±0.086vs0.297±0.053，均P＜0.01）；与M组大鼠比较，F组大鼠肝组织炎症活动度计分降低（3.25±1.70vs5.12±1.64，P＜0.05）；肝细胞凋亡指数显著降低（62.14±8.77vs85.10±3.54，P＜0.01）；肝组织PPAR-amRNA和Bcl-2 mRNA的表达量均显著升高（0.381±0.097vs0.201±0.035和0.359±0.078vs0.209±0.080，均P＜0.01）；Bax和Caspase-3 mRNA的表达量均显著下降（0.354±0.051vs0.486±0.061和0.395±0.086vs0.521±0.080，均P＜0.01）；肝组织中Bcl-2蛋白表达显著升高（0.0173±0.0020vs0.0053±0.0002，P＜0.01）；Bax和Caspase-3蛋白表达显著下降（0.1147±0.0114vs0.2817±0.0180和0.1465±0.0070vs0.2288±0.0355； P均＜0.01）。
　　结论：（1）高脂饲料喂养SD大鼠可以成功复制NAFLD模型。（2）PPAR-a激动剂（非诺贝特）对不同时间点的 NAFLD大鼠肝组织脂肪变性和炎症反应均有不同程度的改善，可不同程度抑制NAFLD大鼠肝细胞凋亡。（3）激活PPAR-a可能具有抗凋亡的作用，这或许可以为NAFLD治疗提供新的思路。