他克莫司软膏的研制及质量标准研究

大环内酯类抗生素广泛应用于临床已有许多年的历史。1984年，日本Fujisawa制药公司首次从链霉菌Streptomyces tsukubaensis的发酵液中提取分离出一种新的大环内酯类抗生素，其相对分子质量为822×103道尔顿，后来正式被命名为他克莫司[1]。1987年，首次有研究者报道出他克莫司对T淋巴细胞具有明显的免疫抑制作用[2]。1989年，他克莫司首次被用于肾脏、肝脏、胰腺等器官的移植，后又用于心、肺等器官的移植，其表现出的免疫抑制作用是环孢菌素的50～100倍[3]。1992年，Mrowietz等研究者指出口服他克莫司治疗银屑病时可使皮损迅速消失，这也是最早报道出的大环内酯类免疫抑制剂全身系统性给药能够治疗皮肤科疾病的案例[4]。他克莫司的分子量较环孢菌素小，易渗入皮肤，因此外用他克莫司对变应性接触性湿疹有较好的疗效。1994年Nakogawa等研究者首次用0.03％、0.1％以及0.3％的他克莫司进行开放性研究治疗有或无苔藓化的异位性皮炎，结果显示有效率分别为38.2％和48.5％，约1/3患者有局部刺激反应，但均勿需停药[5]。2000年12月他克莫司在美国获得正式批准用于治疗中至重度异位性皮炎，是继皮质固醇类激素使用50多年来第一个治疗异位性皮炎的非皮质类固醇性局部免疫调节剂[6]。
　　他克莫司在皮肤科的应用有许多方面，可分为系统治疗和局部治疗。由于他克莫司的全身系统性治疗具有一定的毒副作用，因此目前对于其皮肤外用制剂的研究推广正成为一个新的热点[7]。他克莫司的局部治疗主要用于皮肤科疾病，最常用的是特应性皮炎，其次还包括白癜风、银屑病、湿疹、鱼鳞病、皮质类固醇引起的酒渣鼻、坏疽性脓皮病、扁平苔藓、慢性皮肤型移植物抗宿主病、斑秃、结节病等。
　　他克莫司发挥作用的主要靶点是淋巴细胞，通过抑制淋巴细胞早期相关基因的表达，抑制T淋巴细胞的免疫活性[8]。他克莫司能穿过细胞膜，与细胞内的特异性受体(FKBP)结合，选择性作用于钙离子依赖的信号转导途径，使钙调磷酸酶失活，从而抑制了依赖活化T细胞核因子(NF-AT)的细胞基因转录;此外，他克莫司还可抑制5-羟色胺及白三烯的生成[7]。
　　本文以他克莫司作为模型药物，制成皮肤外用制剂，并对其进行质量标准的研究。首先我们对他克莫司软膏的处方工艺进行研究，选择适宜的主药溶剂、软膏基质、润滑剂、增稠剂以及硬化剂，同时对各种辅料的用量进行了筛选和评估，通过评价他克莫司软膏的外观性状、均匀度、易于涂展性、黏度、锥入度等参数，采用软膏剂的常规制备方法进行试验研究，确定了优选处方。
　　其次在质量标准研究方面，我们按照相关要求对他克莫司软膏进行了质量标准的制定。主要考察指标为性状、鉴别、均匀性、装量、有关物质、主药含量等。我们采用的是高效液相色谱法测定他克莫司软膏中的有关物质和主药含量，并对有关物质及含量测定的方法进行了方法学考察，从而建立了一整套能够控制成品质量的检测标准。
　　此外，我们还对他克莫司软膏进行了初步稳定性研究，包括影响因素试验（高温试验，高湿试验，光照试验）、加速6个月的稳定性试验以及长期12个月的稳定性试验。根据稳定性试验的结果，我们确定了他克莫司软膏的贮藏条件为室温25℃下保存，允许的温度范围是15～30℃。他克莫司软膏可以在室温下存放24个月。
　　最后，我们对他克莫司软膏进行了体外透皮吸收试验，并进行了方法学验证。研究结果显示，主药他克莫司的累积渗透量与渗透时间呈良好的线性关系，自制他克莫司软膏与市售普特彼软膏的透皮行为相当，表明本品体外透皮效果良好，疗效确切。