片仔癀对大鼠慢性酒精性肝损伤的防治作用及其机制探讨

目的:1.参照已有研究建立酒精吡唑混合液灌胃复制大鼠慢性酒精性肝损伤模型;2.从药效学角度观察不同浓度片仔癀对大鼠ALD的防治作用，为开拓新型的抗ALD中成药提供可信的实验基础;3.探讨片仔癀对ALD的防治作用与Hcy——PERK/eIF2α——Caspase-12，9，3信号通路的内在关系，为ALD“湿热淤血”的病机学说和“清热化瘀”的治法提供实验依据。
　　方法:1.喂养高脂饲料的同时，用酒精加吡唑混合溶液灌胃的方法，采用酒精浓度从低到高增至大鼠承受的最大限度的方式，进行ALD造模，并且结合体重、肝脏指数、相关生化指标、病理形态等多方面对造模效果进行综合评价;2.结合体重和肝脏指数、相关生化指标、病理形态等多方面评价不同浓度片仔癀对ALD的防治作用;3.检测Hcy浓度和相关信号分子基因和蛋白的表达，评价片仔癀对相关信号分子的影响。
　　结果:1.造模对大鼠生理状况影响巨大，ALD症状明显甚至出现死亡;与正常组大鼠相比，模型组体重降低，肝脏指数升高(P＜0.05或P＜0.01);ALT、AST、TBIL升高，ALB降低(P＜0.05或P＜0.01);TG、TCH、LDL升高(P＜0.05或P＜0.01);肝小叶结构紊乱，小叶内散在少数点灶状肝细胞坏死，肝组织出现细胞肿胀，肝细胞板排列紊乱，小叶中央静脉周围和汇管区有炎细胞浸涧，可见弥漫性肝细胞气球样变、脂肪变性，肝窦扩张，肝细胞胞质疏松，内有脂肪空泡，虽然未形成纤维化，但是已有明显的ALD病理表现。2.与模型组大鼠相比，片仔癀可以减轻大鼠的醉酒状态，改善酒醉大鼠的生理状态;不同浓度剂量组能不同程度地显著降低大鼠血清ALT、AST、ALB、TBIL(P＜0.05或P＜0.01)，降低TG、TCH(P＜0.05或P＜0.01);各剂量组能够维持肝脏结构，保护肝细胞形态，减少凋亡坏死细胞，减轻炎性细胞浸润，改善脂肪变性。3.与正常组大鼠相比，模型组大鼠Hcy含量显著升高，已形成Hhcy，GRP78、GRP94、Caspase-3的mRNA表达显著升高(P＜0.05或P＜0.01)，Caspase-12、Caspase-9的mRNA表达虽然没有统计学差异，但是也有升高的趋势;GRP78、GRP94、Caspase-12，9，3的蛋白表达升高(P＜0.05或P＜0.01)，eIF-2α、p-eIF-2α虽然没有统计学差异，但是也有升高趋势。而与模型组大鼠相比，片仔癀可以显著降低Hcy浓度(P＜0.05或P＜0.01)，不同剂量组能不同程度地下调GRP78、GRP94和Caspase-9的mRNA表达(P＜0.05或P＜0.01)，下调GRP78、GRP94和Caspase-12的蛋白表达(P＜0.05或P＜0.01)。以上结果表明，片仔癀能显著减轻ALD大鼠的Hhcy，对GRP78、GRP94具有显著的调节作用，对Caspase-12，9，3特异级联反应有不同程度的调节作用。结论:1.应用逐渐增加酒精吡唑混合溶液浓度的方法，结合高脂饮食可以成功建立大鼠ALD模型，该模型符合ALD的病变过程和临床疾病诊断标准;2.片仔癀可以通过改善ALD大鼠的生理状态、肝功能指标、血脂水平、肝细胞病理学形态等方面，防治ALD;3.片仔癀对ALD的防治作用，可能与调节Hcy、影响PERK/eIF-2α信号通路介导的ERS有关。