庆大霉素中毒大鼠耳蜗中p75NTR和TrkB的表达

研究背景：
　　目前，听力障碍仍是一种普遍的疾病，严重影响病人的生活质量。据有关部门提供的资料统计，我国大约有2780万人遭受着听力障碍的困扰，其中7岁以下儿童有80万人，老年人949万人。由于各种原因，如遗传、感染、疾病、环境噪声污染、意外事故等，新生儿中每年增加约3万名的聋儿。这些患者中，小部分是先天性的，绝大部分都是后天性形成的。后天性耳聋的病因中，药物性耳聋占绝大多数，而药物性耳聋的患者中多数是由于滥用氨基糖苷类抗生素引起的，其中应用最多的庆大霉素，它将造影永久性不可逆的听力损失。
　　虽然人工耳蜗的植入可以在一定程度上提高患者的听力，但人工耳蜗仍有很多限制。另外，人工耳蜗植入所作用的靶细胞是螺旋神经节细胞(spiral ganglion neurons，SGN)，耳聋患者耳蜗损伤会引起继发性螺旋神经节细胞变性，从而降低人工耳蜗植入的效果。动物实验表明，螺旋神经节细胞的变性至少有部分原因是神经营养因子的供应不足所致。国内外的许多研究也都证实，无论是在体或是离体，给予一定量的神经营养因子均能够保护螺旋神经节细胞，抵抗外源性因素对听觉器官的损害。神经营养因子是通过与神经元细胞表面的受体结合而发挥作用的，可以推测神经营养因子受体在内耳的发育以及损伤过程中也是至关重要的。国内关于神经营养因子受体在耳聋中作用的研究很少，因此本实验中建立大鼠耳聋的动物模型，通过免疫组化法观察神经营养因子受体在耳聋耳蜗中的表达情况。
　　研究目的:
　　1.观察中毒大鼠耳蜗中神经营养因子受体p75NTR及TrkB的表达变化情况。
　　2.探讨神经营养因子受体在耳蜗的表达与氨基糖苷类抗生素所致的耳聋之间的关系。
　　材料和方法:
　　1.动物模型的建立
　　将30只健康成年的SD雄鼠（由河南省实验动物中心提供），随机分成2组:实验组和对照组，每组15只。实验组:腹腔注射硫酸庆大霉素160mg/kg，1次/天，连续给药14天，第15天处死;对照组:腹腔注射等量的生理盐水，1次/天，连续给药14天，第15天处死。给药前和处死前每组动物均行听性脑干反应(ABR)测试，记录ABR测试结果。
　　2.耳蜗取材和免疫组化染色
　　腹腔注射10％水合氯醛，剂量为0.4ml/100g，麻醉生效后，分别用生理盐水和4％多聚甲醛行心脏灌注，然后迅速短头，取出听泡，去除多余骨质，开放卵圆窗和圆窗，置于4％多聚甲醛中固定48小时，取出标本PBS缓冲液冲洗后置入10％EDTA中脱钙，连续10天。修剪标本，自来水冲洗，然后进行梯度酒精脱水，石蜡包埋，平行于蜗轴连续切片，每个标本切片4张，分别进行HE染色，P75NTR免疫组化染色，TrkB免疫组化染色和阴性对照。SPSS17.0统计软件进行统计学分析。
　　结果：
　　1.成功建立了庆大霉素中毒的耳聋动物模型。
　　2.实验组动物平均ABR阈值较对照组明显增加。
　　3.HE染色示:实验组耳蜗Corti's器破坏，螺旋神经节细胞核深染，血管纹变薄，对照组耳蜗形态正常。
　　4.免疫组化结果示:实验组TrkB表达量较对照组明显下降，差异有统计学意义(P＜0.05);而实验组p75NTR表达量较对照组明显增加，差异有统计学意义(P＜0.05)。
　　结论：
　　1.利用硫酸庆大霉素腹腔注射可以成功建立大鼠耳毒性药物损伤的耳聋模型。
　　2.耳聋大鼠耳蜗的TrkB表达降低、p75NTR表达增强，反映了这两种神经营养因子受体在耳蜗损伤过程中发挥了不同的作用，p75NTR可能诱导凋亡。