本研究主要根据转基因技术设计,以高大乔木胡杨和模式植物拟南芥为研究材料。通过花序侵染法,以农杆菌为介导将胡杨大片段基因转移到模式植物拟南芥中。研究中利用SilwetL-77作为侵染液,在不同浓度,不同时间下,将农杆菌中携带的胡杨大片段基因转入到拟南芥中,将获得的转化后的种子进行抗性培养基的筛选,通过对可能的阳性转化子进行DNA的提取,验证胡杨基因是否转入到拟南芥中,将阳性转化子进行抗性培养基筛选,分子检测、并筛选表型变化的突变体。为了更进一步研究胡杨基因组学,必须获得可以稳定遗传且携带胡杨基因的纯合子,还需要继续培养阳性转化子,进行抗性筛选和传代遗传差异筛选。
本研究主要内容包括:⑴最佳农杆菌菌种活化培养条件是YEP液体培养基,活化时间24h时。最佳转化体系为300ulSilwetL-77/L侵染液侵染7min和500ulSilwetL-77/L侵染液侵染1min。⑵在转化的862个克隆株系中,通过抗性培养基筛选并提取了约1500个转化子的DNA,其中大部分表现出阳性,获得了171个株系的阳性转化子。筛选过程中得到的最佳消毒法为酒精消毒法。⑶在多次的筛选及后代观察中获得了7个具有表型变化的突变体。⑷在针对拟南芥的培养中,做了一定的改动,使得它在特定的环境条件下生长,以便发育强壮利于转化。本文对胡杨基因库的完善具有很大的贡献,也为研究胡杨基因组的作用提供了理论依据。