人参皂苷Rb1对癫痫大鼠海马神经元凋亡和β-catenin蛋白表达的影响

目的:探讨人参皂苷Rb1对青霉素诱导癫痫大鼠海马神经元凋亡和β-catenin蛋白表达的影响。
　　方法:雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠30只(体重250±50g)，随机分为4组:空白对照(BC)组(n=6)、人参皂苷Rb1对照(GC)组(n=8)、青霉素致痫(PE)组(n=8)和人参皂苷Rb1干预致痫(GPE)组(n=8)。人参皂苷Rb1对照组和人参皂苷Rb1干预致痫组大鼠在模型制备前1h腹腔注射1％人参皂苷Rb1注射液3ml/Kg(30mg/Kg)，空白对照组和青霉素致痫组大鼠则腹腔注射等剂量生理盐水。大鼠癫痫模型的制备采用腹腔注射青霉素760万U/Kg的方法，即青霉素致痫组和人参皂苷Rb1干预致痫组大鼠腹腔注射80万U/ml青霉素注射液9.5 ml/Kg，空白对照组和人参皂苷Rb1对照组大鼠则腹腔注射等剂量的生理盐水。模型制备后观察大鼠行为学改变，并记录癫痫发作等级。模型制备后3h时，各组大鼠腹腔注射3％戊巴比妥钠1 ml/Kg麻醉，开胸暴露心脏，剪开右心房，将穿刺针经左心室刺入升主动脉，用生理盐水快速灌注冲洗，然后用4％多聚甲醛500ml灌注固定，开颅，取出脑组织浸泡于4％多聚甲醛8～12h后固定。常规酒精脱水，石蜡包埋，连续切片（厚度4μm）。苏木精-伊红染色法（HE）染色，光镜下观察海马神经元组织学结构变化;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记（TUNEL）法测海马神经元凋亡;免疫组化法测海马神经元β-catenin蛋白的阳性表达。
　　结果:(1)大鼠癫痫发作的行为学改变:空白对照组和人参皂苷Rb1对照组大鼠无痫样发作表现;青霉素致痫组大鼠癫痫发作明显，发作等级达Ⅲ级及以上，其中Ⅲ级3只(3/8)，Ⅳ级2只(2/8)，Ⅴ级3只(3/8);人参皂苷Rb1干预致痫组大鼠癫痫发作程度较青霉素致痫组明显减轻，发作等级仅为Ⅰ-Ⅱ级，其中Ⅰ级3只(3/8)，Ⅱ级5只(5/8)。(2)海马神经元组织结构改变:空白对照组和人参皂苷Rb1对照组大鼠海马神经元形态结构正常;青霉素致痫组和人参皂苷Rb1干预致痫组大鼠海马神经元出现变性和坏死损伤，但后者损伤程度较轻。(3)海马神经元细胞凋亡变化:各组大鼠海马CA1、CA2、CA3和齿状回区均有神经元凋亡。空白对照组、人参皂苷Rb1对照组、青霉素致痫组和人参皂苷Rb1干预致痫组大鼠海马CA1区凋亡神经元计数（个）分别是2.5±1.05、1.75±0.71、3.5±0.93和1.63±0.74; CA2区凋亡神经元计数分别是3.33±1.03、1.50±0.76、6.13±1.23、2.75±0.71;CA3区凋亡神经元计数分别是3.83±1.17、3.75±0.71、8.38±1.3、5.38±1.19;齿状回凋亡神经元计数分别是3.5±1.38、3.38±0.92、21.75±3.85、10.88±3.36。与空白对照组相比，青霉素致痫组和人参皂苷Rb1干预致痫组大鼠海马区凋亡阳性细胞数明显增高，差异具有统计学意义（P＜0.05）。与青霉素致痫组比较，人参皂苷Rb1干预致痫组海马区凋亡阳性细胞数明显减少（P＜0.05）。与人参皂苷Rb1对照组比较，人参皂苷Rb1干预致痫组海马区凋亡阳性细胞数明显增高（P＜0.05）。(4)海马神经元β-catenin蛋白表达变化:空白对照组、人参皂苷Rb1对照组、青霉素致痫组和人参皂苷Rb1干预致痫组大鼠海马β-catenin蛋白表达OD值的平均值(AO)分别是(16.94±0.17)×10-2、(20.39±2.64)×10-2、(18.79±0.67)×10-2和(17.07±0.5)×10-2。与空白对照组相比，人参皂苷Rb1对照组和青霉素致痫组β-catenin蛋白阳性表达高于空白对照组(P＜0.05);与青霉素致痫组相比，人参皂苷Rb1干预致痫组β-catenin蛋白阳性表达明显减低(P＜0.05);与人参皂苷Rb1对照组比较，人参皂苷Rb1干预致痫组β-catenin蛋白阳性表达明显减低(P＜0.05)，差异均具有统计学意义。
　　结论:青霉素诱导癫痫大鼠海马神经元凋亡增加和β-catenin蛋白表达升高;人参皂苷Rb1能够减轻青霉素致痫大鼠的癫痫发作、减少海马神经元细胞凋亡和抑制β-catenin蛋白表达的上调。