进展性结直肠腺瘤再发相关分子的作用及其机制研究

目的:进展性结直肠腺瘤(ACRA)是结直肠癌(CRC)的癌前疾病，早期识别ACRA再发是降低CRC发病率的关键。本课题旨在通过高通量芯片初筛和临床样本验证，寻找ACRA切除术后腺瘤再发相关microRNAs(miRs)，并从miR靶基因角度初步探讨了可能影响ACRA再发的分子机制。
　　方法:通过miRmicroarray，检测腺瘤再发进展性结直肠腺瘤(RACRA)和未腺瘤再发进展性结直肠腺瘤(NRACRA)的miR的差异表达谱;筛选腺瘤再发相关miR，用qRT-PCR分别在福尔马林固定-石蜡包埋(FFPE)和粪便标本中对芯片结果进行验证，以此评估FFPE和粪便miR对ACRA切除术后腺瘤再发的预测价值。对已证实的与腺瘤再发相关的miR-194，用生物信息学软件预测其靶基因，挑选与肿瘤细胞的增殖关系密切的靶基因进行研究。应用基因干预方法、荧光素酶报告实验、靶基因结合区突变实验确立AKT2为miR-194的靶基因。利用原位杂交(ISH)和免疫组化(ICH)分别在正常结直肠组织、RACRA和NRACRA的FFPE组织中观察miR-194和AKT2的表达，进一步验证miR-194和AKT2是否与腺瘤再发相关，同时观察两者的负调控关系。
　　结果:
　　1.miR-10a,miR-141,miR-146a,miR-151,miR-194和miR-3607-3p在正常结直肠组织、NRACRA和RACRA中表达依次降低，符合肿瘤发展的规律，故作为候选miR在临床队列中进一步验证。
　　2.在回顾性队列中，miR-194以阈值log10(2。△Ct)≤0.1311为界，能较好地预测腺瘤再发，敏感性和特异性分别为71.0％和78.0％。miR-194低表达在前瞻性队列中同样具有较好的预测能力，敏感性和特异性分别为76.1％和77.2％。基于FFPEmiR-194低表达、吸烟、饮酒嗜好和CRC一级亲属是ACRA切除后腺瘤再发的独立高危因素，联合后预测效率明显提高，AUC达0.860。
　　3.miR-194在粪便和FFPE组织中表达量呈显著正相关。同时，粪便miR-194具有较好的腺瘤再发的预测效率，以阈值log10(2。△Ct)≤1.0276为界，敏感性和特异性分别为60.0％和88.1％。
　　4.AKT2为miR-194的靶基因。miR-194和AKT2在正常结直肠组织、NRACRA和RACRA组织中表达分别依次降低和增高，两者呈显著负相关。
　　结论:基于FFPE或粪便miR-194低表达可有效预测ACRA切除后腺瘤再发，在有烟酒嗜好患者或CRC一级亲属中效率更高，可作为个体化随访的标志物。miR-194可能通过AKT2在ACRA切除术后腺瘤再发中发挥作用。