[目的]
1.建立非酒精性脂肪性肝病大鼠模型。
2.明确糖基转移酶Glt8D2在非酒精性脂肪性肝病大鼠模型肝脏中的表达。
[方法]
1.将SD大鼠随机分为模型组和对照组。应用高脂饮食(Lieber-DeCarli液体高脂饮食饲养7周)制备大鼠非酒精性脂肪性肝病模型。
2.应用免疫组织化学方法观察糖基转移酶Glt8D2在非酒精性脂肪性肝病大鼠肝脏中的表达。
3.应用酶循环法检测大鼠血清ALT和AST,重氮法检测大鼠血清TBIL和DBIL,乳酸法检测大鼠血清LDH。
4.应用HE染色观察大鼠肝脏病理特征,计数肝细胞脂肪变性、小叶内炎症、肝细胞气球样变情况,并计算NAS评分。
5.应用选择性可溶化法检测大鼠血清TC、TG、LDL-c及HDL-c指标,应用ELISA法检测大鼠血清apoB100,应用乳酸比浊法检测LPA。
6.应用统计学软件SPSS17.0分析数据,两组计量数据比较时应用独立样本t检验,等级数据应用两独立样本非参数检验中的Mann-Whitney检验进行非参数检验。
[结果]
1.肝功能指标:模型组大鼠血清ALT水平明显高于对照组大鼠,两者比较有显著性差异(P=0.005)。模型组与对照组大鼠血清AST、TBIL、DBIL以及LDH水平无显著性差异(P分别为0.857,0.475,0.145,0.144)。
2.肝组织病理学:对照组大鼠肝脏细胞无明显脂肪变性,无点状坏死、炎症细胞浸润及纤维化。模型组大鼠肝脏有较多的肝细胞出现脂肪变性,偶见点状坏死及炎症细胞浸润,未见明显纤维化。模型组与对照组的肝细胞脂肪变性、小叶内炎症、肝细胞气球样变及NAS的评分数值的差异有显著性(P均为0.000)。
3.血脂水平:模型组大鼠血清LPA显著高于对照组(P=0.028)。模型组与对照组大鼠血清apoB100、TG、TC、LDL-c以及HDL-c水平无显著性差异(P分别为0.892,0.575,0.360,0.098,0.053)。
4.肝脏Glt8D2免疫组化:对照组大鼠肝脏肝细胞表达Glt8D2,模型组大鼠肝脏肝细胞Glt8D2表达较对照组增强,模型组大鼠肝脏肝细胞内脂滴周围Glt8D2表达显著。
[结论]
1.应用Lieber-DeCarli液体高脂饮食饲养方法成功地制备了NAFLD大鼠模型。
2.正常大鼠肝脏肝细胞表达Glt8D2。
3.NAFLD大鼠肝脏肝细胞Glt8D2表达增强,肝细胞内脂滴周围Glt8D2表达显著,肝脏Glt8D2异常表达可能在非酒精性脂肪性肝病的发病机制中起重要作用。