CYP7A1基因rs1125226位点多态性与原发性高血压的关联性研究

原发性高血压（Essential Hypertension，EH）占高血压患病率的95％以上，作为心血管疾病最主要的危险因素之一，越来越受到人们的重视。近年来，我国EH患病率有逐年增加的趋势，已经成为影响人群健康的重大公共卫生问题。EH是由遗传因素和环境因素共同作用的多基因病，由于遗传因素在EH的发病过程中发挥着重要作用，目前寻找其相关基因的单核苷酸多态（single-nucleotide polymorphisms，SNPs）进而阐明它们发病的遗传机制己经成为研究热点。
　　 胆固醇7α-羟化酶基因（CYP7A1基因）是脂类代谢的重要基因。本研究通过NCBI的SNP数据库找到CYP7A1基因的上游调控区有个单核苷酸多态位点rs1125226，该位点多态性与胆固醇7α-羟化酶的功能，及EH的发生是否有关，尚无报道。因此，本研究拟以该人群为基础，通过病例对照研究，探讨CYP7A1基因rs1125226多态位点与EH的发生是否相关及其关联程度。
　　 对象与方法：
　　 一、研究对象的选择
　　 本研究利用前期已在辽宁西部彰武地区用整群抽样的方法调查的6000例样本人群。在年龄为25岁至65岁范围内的汉族人群中，随机抽取300名EH患者作为病例组；并在同样年龄范围的正常人群中随机抽取300人作为对照组，收集其资料和血样。
　　 二、高血压诊断标准及测量方法
　　 EH的诊断及分级依据1999年WHO-ISH（世界卫生组织/国际高血压协会）高血压治疗指南公布的标准：收缩压（systolic blood pressure，SBP）≥140mmHg和（或）舒张压（diastolic blood pressure，DBP）≥90mmHg。高血压的分级标准：一级高血压：140mmHg≤SBP<160mmHg和（或）90mmHg≤DBP<100mmHg；二级高血压：160mmHg≤SBP<180mmHg和（或）100mmHg≤DBP<110mmHg；三级高血压：SBP≥180mmHg和（或）DBP≥110mmHg。血压的测量由医护人员在标准条件下按照统一的规范进行操作。
　　 三、人群流行病学调查内容
　　 以现场测量和询问的方式调查并填写调查表。内容包括：①一般状况：包括年龄、性别、民族、家庭住址、家庭人口数等。②可能与EH发病有关的危险因素：包括食盐量、饮食习惯、吸烟情况、饮酒情况、家族史、既往史等。⑨体格检查：测量身高、体重、收缩压、舒张压等，并计算体重指数（Body Mass Index.BMI）。④血样采集：现场抽取早晨空腹非抗凝静脉全血5ml，经离心后分离血清；抽取EDTA抗凝静脉全血6ml，混匀不离心。血样冻存在-20℃的冰箱中备用。
　　 四、检测指标及测定方法
　　 采用日本全自动生化分析仪（7150型）检测血清总胆固醇（total cholesterol，TC）、甘油三酯（serum triglyceride，TG）、高密度脂蛋白（high-density lipoprotein cholesterol，HDL）、低密度脂蛋白（low-density lipoprotein cholesterol，LDL）、血清钠、血清钾、血清铁、血清钙等指标。采用美国强生公司生产的稳捷基础型血糖分析仪检测血糖水平。基因型的检测应用Real-time PCR（ABI 7500）方法，Taqman-MGB探针和引物（c_8893122_10）由ABI公司（Applied Biosystems，美国应用生物系统公司）设计。
　　 五、资料统计分析方法
　　 采用SPSS13.0建立数据库，计量资料以均数±标准差（X-±SD）表示，组间差异应用t检验；计数资料以人数和率表示，其关联分析和Hardy-Weinberg平衡检验应用χ2检验。多因素分析采用多元Logistic逐步回归的方法。统计学上的显著性水平规定为α=0.05。
　　 结果：
　　 一、EH组与对照组的均衡性分析
　　 EH组和对照组间，性别年龄分布无统计学差异。EH组中除了收缩压和舒张压明显高于对照组外，饮酒比例，BMI，血清胆固醇，甘油三酯，LDL，血铁，血钙和血钠指标也分别高于对照组；而HDL和血钾水平则低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。
　　 二、CYP7A1基因，基因rs1125226多态位点在EH与对照间的分布情况
　　 1、本研究人群的Hardy-Weinberg平衡检验和等位基因频率
　　 该多态位点在本研究的病例-对照人群中，基因型频率和等位基因频率分布符合Haydy-Weingerg）平衡（χ2=3.752，P=0.053）。本文596名病例对照人群等位基因A频率为0.3817，与HapMap报道的中国汉族人群该位点的等位基因A频率（0.38）一致。
　　 2、高血压组与对照组间的基因型和等位基因的分布
　　 经过关联分析后，并未发现CYP7A1基因rs1125226多态位点的基因型频率或等位基因频率与EH的发生有统计学关联。
　　 3、高血压患者分组后的基因型和等位基因的分布
　　 为了进一步探究EH患者间该多态位点的基因型和等位基因的分布情况，本研究将EH患者按照高血压分级，收缩压级别和舒张压级别分别划分成三个组。结果显示，在不同程度的EH患者间，基因型和等位基因分布也均未见有统计学差异。
　　 4、性别分层后高血压组与对照组问的基因型和等位基因的分布
　　 将病例对照人群以性别因素分层后，再次进行基因型和等位基因分布与EH的关联分析，不同性别间仍未发现该位点基因型频率或等位基因频率与EH的发生相关。
　　 5、年龄分层后高血压组与对照组间的基因型和等位基因的分布
　　 将病例对照人群以年龄因素分层后进行基因型和等位基因分布与EH的关联分析。在25-35岁和35-45岁年龄段人群中，基因型频率在EH组与对照组间的分布分别出现统计学差异（χ2=7.31，P=0.026和χ2=6.66，P=0.036）。其中25-35岁的EH组中AA基因型频率（25％）略高于对照组（20％）；35-45岁的EH组中AA基因型频率（26.6％）明显高于对照组（10.8％）。
　　 三、研究人群高血压发生的多因素分析
　　 Logistic回归分析结果显示：经其他因素调整后，rs1125226位点基因型未能进入高血压模型。饮酒情况，BMI，TG，LDL，血清Na和血清K指标进入了回归方程。其中除血清K是高血压发生的保护因素外（OR=0.514，95％CI：0.319～0.827），其余各指标均是高血压发生的危险因素。
　　 讨论：
　　 在本研究纳入的298名彰武地区的EH人群中，合并TC异常的有146名（49.2％），合并GTG异常的有96名（32.3％），合并LDL-C异常的有109名（36.7％），合并：HDL-C降低的有21名（7.1％）。其中Tc、TG、LDL-C，和HDL-C四个指标中至少有一种指标超出正常范围的有193人（64.98％）。可见，本研究人群EH合并血脂异常的情况非常普遍，这与其他研究结论相似，说明本地区人群EH的发生与血脂异常可能有着密切的关联，即血压调节和血脂代谢可能存在共同的遗传基础。
　　 迄今为止，通过连锁分析和候选基因的关联分析，己经确定了150多种EH候选基因及其相应的多态性位点。实际上，某些基因多态性只与一定的中间表型或一定的种族或人群相关，而不同人群中必定有不同的基因与EH相关。这些事实阐明了EH的复杂性和多效性，即EH具有明显的种族差异，不同人群中无主效基因，可能存在多个“微效基因”的联合作用。有时单一基因对血压的影响是有限的，但多个微效基因的联合作用可能对血压的影响达到一个闭值而促使EH的发病。这可能也是本研究未发现CYP7A1基因rs1125226多态位点上的基因型或等位基因频率与辽宁西部地区人群EH的发生有关联的原因。然而，该多态位点的基因型分布频率在该地区中青年人群（25-45岁）中却可能与EH的发生有关，其中AA基因型可能是该地区中青年人群EH发病的独立危险因素（调整后OR=3.399，95％CI：1.299～8.893，P=0.013）。
　　 另外，本研究采用了目前公认的多元Logistic逐步回归模型，分析了遗传与环境因素在EH的发生中所起的作用。分析结果显示，CYP7A1基因rs1125226多态位点基因型，作为自变量未能进入EH的病因模型。我们还发现，在本地区居民EH的发病危险因素中，优势比值OR>1.5的因素有高水平LDL和饮酒。经流行病学调查我们知道，本地人群确实有高脂饮食，酗酒等不良生活习惯。因此，如果该地区居民能改善这两方面的生活习惯，相信该地区EH高发的情况很可能会得到有效的控制和预防。
　　 结论：
　　 在辽宁彰武地区人群中，CYP7A1基因rs1125226多态位点与EH的发生可能无关。然而，该多态位点的基因型分布在该地区中青年人群（25-45岁）中可能与EH的发生有关，其中AA基因型可能是中青年人群EH发病的独立危险因素。另外，EH病因的多因素分析显示：饮酒，高水平BMI，高水平TG，高水平LDL，高水平的血清Na及低水平的血清K是该地区人群EH发病的独立危险因素。