秀珍菇子实体多糖的分离纯化、结构鉴定和生物活性研究

秀珍菇（Pleurotus geesteranus）又名白平菇，其学名为黄白侧耳，菇形秀小、白漂，口感脆嫩，菇味清香浓郁，营养丰富，富含蛋白质、多糖、脂肪、维生素和微量元素，人体必需8种氨基酸含量齐全，备受广大消费者喜爱。
　　本论文共有四个部分，分别是秀珍菇子实体多糖的提取分级和抗氧化活性筛选、纯化和理化性质研究、均一组分的结构鉴定和体外抗肿瘤活性的研究。
　　秀珍菇子实体经95％的酒精脱脂处理后，沸水浸提得到粗多糖，再经超滤分级和抗氧化活性筛选，发现PGPB(10 KDa＜平均分子量＜100 KDa)组分的含量相对较多，且还原能力最高，同时羟基自由基清除能力和DPPH清除能力也较高，因此选取PGPB进一步研究。
　　秀珍菇子实体粗多糖PGPB经DEAE-Sepharose Fast Flow和Sephacryl S300、Sephacryl S400层析纯化得到的两个均一组分:水相的PGP1和盐相的PGP2，平均分子量分别为1.3×104 Da和＞2.0×106 Da。选取PGP1进行理化性质的检测，紫外扫描的结果表明其不含蛋白质和核酸。
　　PGP1经乙酰化和甲基化分析后，再结合NMR谱（一维:1HNMR谱、13CNMR谱和二维谱:COSY谱、TOCSY谱、NOESY谱、HMQC谱和HMBC谱）等方法对其结构进行解析。乙酰化结果表明该多糖组分主要由四种单糖组成，分别为D-甘露糖、D-葡萄糖和D-半乳糖，及一未知单糖，GC-MS推测该组分为3(4)-O-甲基-己糖。甲基化后GC-MS分析得出残基分别是端基的甘露糖，6位取代的半乳糖和葡萄糖，还有2，6位取代的3-O-甲基半乳糖，其摩尔比为1∶0.25∶1.14∶0.94。一维和二维的NMR图谱进一步分析得到PGP1组分的大致结构如下:β-D-Manp↓2→6）-α-D-Galp（1→6）-α-3-O-Me-D-Galp-(1→同时含有少量的6-D-Glcp。
　　超滤分级得到的四个组分(PGPA，PGPB，PGPC，PGPD)和PGP1，PGP2的体外抗肿瘤作用的研究发现，所有组分对S180均具有较好的抑制效果，对正常细胞CHL没有毒副作用。四个超滤组分中，PGPD对肿瘤细胞的抑制率明显高于其他三个组分，并呈现一定的剂量依赖性。而PGP1和PGP2的S180的抑制效果明显优于粗品，说明其中的活性成分主要为多糖成分。