非诺贝特保护非酒精性脂肪性肝病小鼠肝脏损伤机制的初步探讨

目的：观察高热量高胆固醇饮食(high-calorie and high-cholesterol diet,HCD)对C57BL/6小鼠肝脏的影响,初步探讨非诺贝特(fenofibrate)对非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)小鼠肝脏损伤的保护作用机制。
　　方法：将C57BL/6小鼠随机分为正常饮食(SCD)组、高热量高胆固醇饮食(HCD)组和非诺贝特治疗(HCF)组。用高热量高胆固醇饮食喂养3月,建立非酒精性脂肪性肝病小鼠模型,3月后,用非诺贝特(40mg/kg/d)治疗4周。葡萄糖耐量试验(GTT)和胰岛素耐量试验(ITT)测定胰岛素敏感性,检测TG、TC、LDL-C、HDL-C、ALT、AST等血清生化指标以及TNF-α、IL-6、MCP-1等炎性指标水平,HE、油红及 Masson染色观察肝脏组织的病理学变化,制备10％肝组织匀浆测定MDA、GSH-Px、T-AOC和SOD等氧化应激指标及TG含量情况,免疫组化检测肝脏组织中TNF-α、CD68炎性分子表达,TUNEL法检测小鼠肝细胞的原位凋亡,Real-time RT-PCR和RT-PCR测定肝组织PPARα、SREBP1-c、PTP1B、IRE-α、CHOP和GRP78 mRNA表达,Western-blot检测肝组织GRP78、JNK、ERK蛋白表达量。
　　结果：①GTT试验和ITT试验表明,HCD组小鼠胰岛素敏感性降低,存在胰岛素抵抗,而非诺贝特治疗后能够增加胰岛素敏感性,改善胰岛素抵抗。②与SCD组小鼠相比,HCD组小鼠血清TG、TC、LDL-C水平显著升高,HDL-C水平明显下降(P<0.01或P<0.05)。非诺贝特治疗后能够显著降低血清TG水平(P<0.05)。③HCD组小鼠肝细胞内可见脂滴形成,气球样变的肝细胞及炎性细胞浸润,但尚未进展至纤维化阶段,而HCF组肝脏脂肪变性程度及浸润的炎细胞明显减少。④HCD组小鼠血清 TNF-α、MCP-1等促炎因子明显升高,而 IL-6等抗炎因子降低(P<0.05),HCF组小鼠血清促炎因子MCP-1明显降低(P<0.05)。免疫组化结果表明,与SCD组相比,HCD组小鼠肝脏TNF-α和CD68的表达量均增加。非诺贝特治疗后能够降低炎性分子表达量,减轻炎症反应。⑤TUNEL结果显示 HCD组小鼠肝细胞出现明显凋亡,而HCF组小鼠体内发生凋亡的肝细胞明显减少。⑥与SCD组相比,HCD组小鼠肝组织内MDA明显增加,T-SOD和GSH-Px明显降低(P<0.05)。与HCD组相比,HCF组小鼠肝组织内T-SOD、T-AOC明显增加,MDA明显降低(P<0.05)。⑦HCD组小鼠肝组织内SREBP-1c、PTP1B、IRE-α、XBP-1s和CHOP mRNA的表达增加,而PPARα、GRP78 mRNA的表达降低,非诺贝特治疗后能降低 PTP1B、IRE-α、XBP-1s和CHOP mRNA的表达量,增加PPARα、GRP78 mRNA的表达量;此外,HCD组小鼠肝组织内GRP78、JNK蛋白表达量明显降低,而ERK蛋白表达量明显升高,非诺贝特治疗后,下调的GRP78、JNK蛋白表达量显著升高,而上调的ERK蛋白表达量显著降低。
　　结论：①高热量高胆固醇饮食能够成功构建NAFLD小鼠模型;②非诺贝特治疗后可降低模型小鼠血脂水平、增加胰岛素敏感性、减轻炎症反应、减少氧化应激和内质网应激水平,改善肝脏病理损伤;③非诺贝特可能是通过减轻内质网应激中的IRE-α—XBP-1通路发挥肝脏保护作用的。