生姜为姜科植物(Zingiber officinale Rosc)的鲜嫩根茎。现代研究发现,生姜有效成分具有抗氧化和清除自由基,降胆固醇、降血脂、保肝利胆等多种功效。而酒精代谢过程中所产生的自由基,其引起的脂质过氧化反应是导致酒精性肝损伤的重要因素之一。因此,生姜保肝利胆,清除自由基的功效使其在预防和治疗酒精性肝损伤的方面拥有巨大的开发潜力。本课题对生姜乙醇初提物干预酒精性肝损伤进行研究,并按极性对提取物分离和抗氧化活性测定,筛选出最优的活性部位。
1生姜乙醇初提物的制备和极性部位分离
通过乙醇浸提,减压浓缩,冷冻干燥获得生姜乙醇初提物。用AB-8大孔树脂按极性对生姜提取物(初提物)进行分离,得到水相,25%乙醇相,50%乙醇相,75%乙醇相,95%乙醇相5个极性部位。
2生姜乙醇初提物及分离部位姜辣素测定
以香草醛作为标准品,绘制标准曲线,利用香草醛标准曲线测定生姜乙醇初提物中姜辣素含量为6.4%,各分离部位中姜辣素含量分别为:水相含1.3%,25%乙醇相含11.5%,50%乙醇相含34.7%,75%乙醇相含32.3%,95%乙醇相含28.5%。
3生姜乙醇初提物及分离部位抗氧化活性测定
制作肝匀浆脂质过氧化模型,诱导其生成MDA,测定生姜初提物及分离部位产物对肝匀浆生成MDA的抑制率。50%乙醇相抑制MDA的IC50为0.3mg/mL,效果最好,75%乙醇相为0.3mg/mL,两者都优于维生素E。
类SOD活性显示:50%乙醇相(1.0mg/mL)SOD活性19.59 U/mL,75%乙醇相为19.05 U/mL。两相在对应浓度上活性无显著差异(p>0.05)。
4生姜乙醇初提物干预小鼠酒精性肝损伤
设正常对照组,模型组,低、中、高剂量组。除正常对照组外,每组灌胃10mL/kg的50%(v/v)浓度白酒,1次/d,进行酒精性肝损伤,低、中、高剂量组再分别给予120mg/kg、240mg/kg、480mg/kg的生姜醇提物作为干预,正常对照组灌胃等量的蒸馏水作为对照,连续灌胃30天后,测定血清中谷氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和肝脏中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)。
模型组ALT,AST,MDA含量增加,SOD含量下降,与正常对照组相比差异显著(p<0.05或p<0.01),干预组与模型组相比各指标有不同程度改善,中、高剂量组效果更为显著(p<0.01)。